BCA蛋白定量试剂盒参考价: ¥295
价格: ¥252
货品编号: DY7052
规格:
500T
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BCA蛋白定量试剂盒 | ||||||||
BCA Protein Assay Kit | ||||||||
Cat No:DY7052 | ||||||||
Size:500T | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents |
500 次/微孔,50 次/试管 |
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试剂A | 100 ml | |||||||
试剂B | 3ml | |||||||
标准品(2mg/ml) | 2 ml | |||||||
储运条件 | ||||||||
标准品2-8℃保存,其它组分室温保存。 | ||||||||
说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin -choninic Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液,测定范围为20~2000μg/ml。 | ||||||||
实验前准备及注意事项 | ||||||||
1.本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。 | ||||||||
2.建议每次测定蛋白样品时,绘制标准曲线,以获得准确数据。 | ||||||||
3.BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。 | ||||||||
4.完成37℃孵育30min或室温孵育2h后,须在3-5min内完成检测,否则会影响蛋白定量的准确度。 | ||||||||
5.如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1),可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(LY7055)或其他蛋白定量产品。 |
附表1. 干扰物质表 | ||||||||
化合物 | 耐受浓度 | 化合物 | 耐受浓度 | |||||
缓冲液 | 去垢剂和变性剂 | |||||||
乙酸盐 | 0.2M | Brij35 | 1% | |||||
甘氨酸 | 1M | CHAPS | 1% | |||||
HEPES | 0.1M | 盐酸胍 | 4M | |||||
MES | 50mM | NP-40 | 1% | |||||
MOPS | 50mM | 辛葡糖 | 1% | |||||
Na+-柠檬酸 | <1mM | SDS | 1% | |||||
PIPES | 50mM | Triton X-100 | 1% | |||||
磷酸钠 | 0.1M | 糖类 | ||||||
乙酸钠 | 0.2M pH 5.5 | 葡萄糖 | 10mM | |||||
TES | 50mM | 蔗糖 | 1M | |||||
Tris | 0.1M | 螯合剂 | ||||||
盐类 | EDTA | 10mM | ||||||
硫酸铵 | 干扰 | 还原剂 | ||||||
NaCl | 1M | β-巯基乙醇 | 50μM | |||||
尿素 | 3M | DTT | 1mM | |||||
极性化合物 | 其他 | |||||||
DMSO | 5% | 脂类 | 干扰 | |||||
甘油 | 10% | HCl/NaOH | 0.1M | |||||
操作步骤 | ||||||||
1.稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。 | ||||||||
管号 | 稀释液用量(μl) |
BSA标准品 用量(μl) |
BSA标准品最终浓 度(μg/μl) |
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A | 0 | 100 | 2 | |||||
B | 200 | 200 | 1 | |||||
C | 200 | 200(从B管中取) | 0.5 | |||||
D | 200 | 200(从C管中取) | 0.25 | |||||
E | 200 | 200(从D管中取) | 0.125 | |||||
F | 200 | 200(从E管中取) | 0.0625 | |||||
G | 200 | 0 | 0(空白) | |||||
2.配置BCA工作液: |
1)计算BCA工作液总量: | ||||||||
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积 | ||||||||
举例:BSA标准品样本个数为7个,未知样本个数2个,复孔数3个。 | ||||||||
试管检测法: | ||||||||
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2 ml/每个样本工作液体积=54 ml | ||||||||
微孔检测法: | ||||||||
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200 μl/每个样本工作液体积=5.4ml | ||||||||
2)根据计算出的BCA工作液需要总量,将试剂A和试剂B按照50:1的体积比,配制BCA工作液,充分混匀。 | ||||||||
注意:(1)由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1-2个孔。 | ||||||||
(2)新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。 | ||||||||
3.定量检测 | ||||||||
试管检测法(蛋白浓度检测范围:20-2000 μg/ml) | ||||||||
1)按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100 μl 分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。 | ||||||||
2)向每个试管中各加入2 ml BCA工作液,充分混匀,37℃水浴中孵育30min或室温孵育2h。 | ||||||||
3)将各管冷却至室温。 | ||||||||
4)用分光光度计在562 nm处测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。 | ||||||||
5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。 | ||||||||
微孔检测法(蛋白浓度检测范围:20-2000 μg/ml) | ||||||||
1)按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25 μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。 | ||||||||
2)每孔加入200 μl BCA工作液,充分混匀,盖上96孔板盖, 37℃孵育30min。 | ||||||||
3)冷却至室温。 | ||||||||
4)用酶标仪在540--590 nm范围内,测定每个样品及BSA标准品吸光值,做好记录。 | ||||||||
5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。 | ||||||||
注意:(1)BCA法测定蛋白浓度时,吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5min内完成,否则会影响蛋白定量的准确度。 |
(2)建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。 | |||||||
(3)由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。 | |||||||
(4)未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。 | |||||||
(5)如果得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。 |