细胞核/浆蛋白抽提试剂盒参考价： ￥490
价格： ￥441
货品编号： DY7006
规格：
50T
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| 细胞核/浆蛋白抽提试剂盒 | ||||||||
| NuclearandCytoplasmicExtractionKit | ||||||||
| Cat No:DY7006 | ||||||||
| Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | DY7006 | |||||||
| Buffer 1# | 50 ml | |||||||
| Buffer 2# | 3ml | |||||||
| Buffer 3# | 25ml | |||||||
| 蛋白酶抑制剂混合物 | 750 μl | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 蛋白酶抑制剂混合物：-20℃保存，其他室温保存。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 细胞核/浆蛋白抽提试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、GelShift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1．为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。 | ||||||||
| 2. 如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。 | ||||||||
| 3．可以采用更高的速度来离心。 | ||||||||
| 4．可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为 Buffer 1#：Buffer 2#：Buffer 3#=100：5.5：50。 | ||||||||
| 5．戴手套操作。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 细胞中胞浆、胞核蛋白的提取 | ||||||||
| 1. 取材，保存组织 | ||||||||
| 2. 请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer 1#和Buffer 3#进行预冷， 按照1:99比例加入蛋白酶抑制剂混合物（例如990 μl抽提试剂中加入10 μl蛋白酶抑制剂混合物），使蛋白酶抑制剂混合物在抽提试剂中成1×工作液。 | ||||||||
| 注意：在进行蛋白抽提前2-3min内加入蛋白酶抑制剂混合物。 | ||||||||
| 3. 1×107细胞中加入1mlBuffer 1#（使用前加入蛋白酶抑制剂混合物），涡旋5s以充分混匀，冰上孵育20min。 | ||||||||
| 注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer 1#的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer 1#及后续Buffer 2#、Buffer 3#的用量。 | ||||||||
| 4. 加入55 μlBuffer 2#，涡旋5s以充分混匀，冰上孵育 1min。 | ||||||||
| 5. 4℃ 12,000rpm（13,400×g）离心 15min，收集上清（尽量收集干净上清液）至另一离心管中，-20℃保存待测（此提取液为胞浆蛋白）。 | ||||||||
| 6. 向上步所得的沉淀中加入500 μlBuffer 3#（使用前加入蛋白酶抑制剂混合物），涡旋5s以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40min，每隔10min涡旋混匀一次，每次约15-30s。 | ||||||||
| 7. 4℃ 12,000rpm离心15min，收集上清（尽量收集干净上清液）至另一离心管中，-20℃保存待测（此提取液为胞核蛋白）。 | ||||||||
| 组织中胞浆、胞核蛋白的提取 | ||||||||
| 1. 取材，低温保存组织 | ||||||||
| 2. 请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer 1#和Buffer 3#进行预冷， 按照1:99比例加入蛋白酶抑制剂混合物（例如990 μl抽提试剂中加入10 μl蛋白酶抑制剂混合物），使蛋白酶抑制剂混合物在抽提试剂中成1×工作液。 | ||||||||
| 注意：在进行蛋白抽提前2-3min内加入蛋白酶抑制剂混合物。 | ||||||||
| 3. 称组织重量，每100mg组织中加入1mlBuffer 1#（使用前加入蛋白酶抑制剂混合物），用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20min。 | ||||||||
| 注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer 1#的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer 1#及后续Buffer 2#、Buffer 3#的用量。 | ||||||||
| 4. 加入55 μlBuffer 2#，涡旋5s以充分混匀，冰上孵育1min。 | ||||||||
| 5. 4℃ 12,000rpm（13,400×g）离心 15min，收集上清（尽量收集干净上清液）至另一离心管中，-20℃保存待测（此提取液为胞浆蛋白）。 | ||||||||
| 6. 向上步所得的沉淀中加入500 μlBuffer 3#（使用前加入蛋白酶抑制剂混合物），涡旋5s以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40min，每隔10min涡旋混匀一次，每次约15-30s。 | ||||||||
| 7. 4℃ 12,000rpm离心15min，收集上清（尽量收集干净上清液）至另一离心管中，-20℃保存待测（此提取液为胞核蛋白）。 | ||||||||