| 酵母蛋白提取试剂盒 | ||||||||
| Yeast Protein Extraction Kit | ||||||||
| Cat No:DY7005 | ||||||||
| Size:25T/100T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | DY7005 | DY7005A | ||||||
| 细菌提取试剂 | 25ml | 100 ml | ||||||
| 蛋白酶抑制剂混合物 | 250μl | 1 ml | ||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 蛋白酶抑制剂混合物保存在-20℃，其他室温保存。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 酵母蛋白抽提试剂用于从酵母细胞中快速，高效而温和地抽提可溶性蛋白。采用试剂处理，可以避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。使用方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏。本抽提试剂可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及革兰氏阳性菌的蛋白抽提。与传统方法相比，处理得到的提取液中可溶蛋白产量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于 Ni-NTA 、GST 等亲和纯化。酵母蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 提取液中含有去污剂，不宜使用受去污剂干扰的蛋白定量方法。 | ||||||||
| 2. 为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1. 酵母培养液3000 xg，4℃，离心5min（离心后马上抽提或置于-20℃或-80℃保存）。 | ||||||||
| 2. 请在蛋白抽提前取出实验所需蛋白抽提试剂进行预冷， 按照1:99比例加入蛋白酶抑制剂混合物（例如990 μl抽提试剂中加入10 μl蛋白酶抑制剂混合物），使蛋白酶抑制剂混合物在抽提试剂中成1×工作液。 | ||||||||
| 注意：在进行蛋白抽提前2-3min内加入蛋白酶抑制剂混合物。 | ||||||||
| 3. 按照每50 mg酵母加入500 μl酵母蛋白抽提试剂加入抽提液，涡旋振荡或上下吸打使酵母充分重悬。 | ||||||||
| 4. 将细胞悬液置于冰上，孵育20min（每间隔几分钟轻微摇晃一下）。 | ||||||||
| 5. 12,000 rpm（13,400 xg）离心10min取上清（可提取超过90%的可溶性蛋白，如有需要，可将沉淀进行第二次蛋白抽提）。 | ||||||||
| 6. 上清可进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。 | ||||||||
