细菌蛋白抽提试剂盒参考价： ￥265
价格： ￥225
货品编号： DY7004
规格：
25T
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| 细菌蛋白抽提试剂盒 | ||||||||
| Bacterial Protein Extraction Kit | ||||||||
| Cat No:DY7004 | ||||||||
| Kit Size:25T/100T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 25preps | 100preps | ||||||
| 细菌提取试剂 | 25ml | 100 ml | ||||||
| 蛋白酶抑制剂混合物 | 250 μl | 1 ml | ||||||
| Lysozyme （50 mg/ml） | 50 μl | 200 μl | ||||||
| DNaseⅠ（1,000 U/ml） | 25 μl | 100 μl | ||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂盒中细菌提取试剂室温保存，其他组分-20℃保存。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 细菌蛋白抽提试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白及转染昆虫细胞的蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1．细菌蛋白抽提试剂适用于从新鲜或冻存细菌中提取蛋白，也适用于从杆状病毒转染的昆虫细胞中提取蛋白。 | ||||||||
| 2．本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。 | ||||||||
| 3．使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。 | ||||||||
| 4．使用本产品从一系列常见的宿主菌中抽提可溶性蛋白， 均有较好的提取效 果。对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻细胞。 | ||||||||
| 5．根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 昆虫细胞蛋白提取 | ||||||||
| 1．低速离心收集细胞。 | ||||||||
| 2．称量细胞湿重，按10 ml/g的量加入细菌蛋白抽提试剂。 | ||||||||
| 3．重悬后，冰上孵育20min（冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。 | ||||||||
| 4．15,000×g离心15min，分离可溶性蛋白。 | ||||||||
| 细菌可溶性蛋白提取 | ||||||||
| 1．5,000×g离心10min，收集菌体。 | ||||||||
| 可选步骤：每1 ml 细菌抽提试剂中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、2 μl Lysozyme （50 mg/ml）和10 μl蛋白酶抑制剂混合物，涡旋震荡混匀。 | ||||||||
| 3．按照每克菌体沉淀加入20 ml细菌蛋白抽提试剂的比例，即按照1:20的比例，向菌体沉淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。 | ||||||||
| 4．重悬后，室温孵育10-15min（放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。 | ||||||||
| 5．15,000×g离心5min。 | ||||||||
| 6．转移上清至新的离心管中（上清中即为可溶性蛋白），进行蛋白定量及下游实验。 | ||||||||
| 注意：如过表达的大部分蛋白仍在沉淀中，目的蛋白可能以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液（LY7007）进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。 | ||||||||
| 常见问题 | ||||||||
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 | ||||||
| 目的蛋白不溶 | 目的蛋白表达为包涵体 | 1.优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液 | ||||||
| 2.在蛋白抽提试剂中加入 Lysozyme和 DNase I | ||||||||
| 加入Lysozyme后目的蛋白仍没有提取出来 | 温度过低 | 将使用试剂恢复至室温 | ||||||
| Lysozyme活性降低或失活 | 加入更多的 Lysozyme或更换新的酶 | |||||||
| 提取物粘度高 | DNase I活性降低或失活 | 加更多的 DNase I或更换新的 DNase I | ||||||
| 将镁离子的终浓度增加至 2 mM | ||||||||
| 蛋白抽提后仍有大部分蛋白存在于沉淀中 | 蛋白量过大 | 加入 Lysozyme及 DNase I | ||||||
| 蛋白抽提试剂有沉底析出 | 温度过低 | 将蛋白抽提试剂恢复至室温 | ||||||