聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒
PolyGel Extraction Kit
离心柱式
Cat No:DY6261
Kit Size:50T

产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	100ml
		Buffer 2#	30ml
		Buffer 3#	15ml
		Buffer (concentrate) 4#	10ml
		Buffer 5#	10ml
		过滤柱	50
		吸附柱	50
		收集管	100


储运条件
	本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。

产品简介
	本试剂盒采用新型硅基质膜及特殊的缓冲液系统，高效专一结合DNA，可从聚丙烯酰胺凝胶中高效回收DNA，并可最大限度去除引物、酶、矿物油等杂质，获得高纯度的DNA，满足多种实验要求。本试剂盒可回收50 bp-50 kb的DNA片段，能有效避免大片段DNA在纯化过程中被切断，每个吸附柱可最高吸附20 μg的DNA，且DNA回收效率高达90%。由本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于酶切，连接，PCR扩增、DNA测序等分子生物学实验。
实验前准备及注意事项
	1.本实验需要无水乙醇,离心管请自备。
	2.本试剂盒回收聚丙烯酰胺凝胶中的DNA 片段，如需选择性琼脂糖凝胶中回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒（LY6256, LY6257，LY6258 ）。
	3.使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
	4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 4#中加入无水乙醇。
	5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。
	6．切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
	7.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果
	8..所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤
	1．将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管（自备）中，称取重量。
	2．将凝胶充分捣碎，向凝胶中加入1-2倍体积的Buffer 2#（如100mg凝胶加入100-200 μl Buffer 2#），75℃孵育30min。
	3．12,000 rpm（~13,400×g）离心1min，小心吸取上清，将之加入过滤柱(过滤柱应预先装入收集管中)中，12,000 rpm离心1min，将离心所得的滤液收集在收集管中。
	4．向滤液中加入3倍体积的Buffer 1#；当回收的目的片段<100 bp时，加入6倍体积的Buffer 1#，上下颠倒混匀。
	注意：此时可以检测其pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30 μl 的3 M醋酸钠（pH 5.0）将pH值调到5-7。
	5.柱平衡：向吸附柱（吸附柱预先装入收集管中）中加入200μl Buffe3#，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	6．将步骤4中所得溶液加入到吸附柱（吸附柱预先装入收集管中）中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl可分批加入。
	7．向吸附柱中加入650µl Buffer 4#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验（例如平末端连接实验或直接测序），建议加入Buffer4#后静置2-5min再离心。
	8．12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
	9.将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加20µl Buffer 5#（pH 8.5），室温放置2min。12,000rpm离心1min，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
	注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。
	2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤9。
	3）洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。
	4）如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
	5）回收大于10kb的DNA片段时，Buffer 5##应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

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