大量 DNA 产物纯化试剂盒参考价: ¥310
价格: ¥279
货品编号: DY6252
规格:
50T
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大量 DNA 产物纯化试剂盒 | ||||||||
MaxiDNA Purification Kit | ||||||||
离心柱式 | ||||||||
Cat No:DY6252 | ||||||||
Kit Size:50T | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents | 50preps | |||||||
Buffer 1# | 60ml | |||||||
Buffer 2# | 15ml | |||||||
Buffer (concentrate) 3# | 10ml | |||||||
Buffer 4# | 10ml | |||||||
吸附柱 | 50 | |||||||
收集管 | 50 | |||||||
储运条件 | ||||||||
本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。 | ||||||||
说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
本试剂盒采用新型硅基质膜技术,通过快速简单的结合-洗涤-洗脱步骤即可从大量的 PCR 产物或酶反应液(酶切,连接,探针标记等)中纯化 50 bp-50 kb 的DNA 片段,纯化过程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,从而获得高纯度,高浓度,完整性好的 DNA 片段,回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。 | ||||||||
实验前准备及注意事项 | ||||||||
1.本实验需要无水乙醇,离心管请自备。 | ||||||||
2.本试剂盒可无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择我公司的胶回收试剂盒(LY6256, LY6257,LY6258 )。 | ||||||||
3.使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。 | ||||||||
4.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 3#中加入无水乙醇。 | ||||||||
5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。 | ||||||||
6.所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 |
操作步骤 | ||||||||
1. 估计DNA反应液的体积,加入5倍体积的Buffer 1#,充分混匀(如DNA反应体系为100μl,则加入500μlBuffer 1#,无需去除石蜡油或矿物油)。 | ||||||||
注意:在加入Buffer 1#后检测溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸钠(pH5.0),从而将pH值调到5-7。 | ||||||||
2.柱平衡:向吸附柱(吸附柱预先装入收集管中)中加入200μl Buffer 2#,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
3.将步骤1中所得溶液加入到吸附柱(吸附柱预先装入收集管中)中,室温放置2min,12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
注意:吸附柱容积为700µl,若样品体积大于700µl可分批加入 。 | ||||||||
4.向吸附柱中加入650μl Buffer 3#(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
注意:如果纯化的DNA用于盐敏感实验(例如平末端连接实验或直接测序),建议加入Buffer 3#后静置2-5min再离心。 | ||||||||
5.12,000rpm离心2min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 | ||||||||
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 | ||||||||
6.将吸附柱放到一个新离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加100µl Buffer 4#(pH 8.5),室温放置2min。12,000rpm离心1min,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。 | ||||||||
注意:1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。 | ||||||||
2)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重复步骤6。 | ||||||||
3)洗脱体积不应小于50μl,体积过少会影响回收效率。 | ||||||||
4)如果使用TE洗脱,应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。 | ||||||||
5)回收大于10kb的DNA片段时,Buffer 4#应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。 |