通用型 DNA 纯化回收试剂盒参考价： ￥260
价格： ￥234
货品编号： DY6259
规格：
50T
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| 通用型 DNA 纯化回收试剂盒 | ||||||||
| Universal DNA Purification Kit | ||||||||
| 离心柱式 | ||||||||
| Cat No:DY6259 | ||||||||
| Kit Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 50preps | |||||||
| Buffer 1# | 50ml | |||||||
| Buffer 2# | 15ml | |||||||
| Buffer (concentrate) 3# | 10ml | |||||||
| Buffer 4# | 10ml | |||||||
| 吸附柱 | 50 | |||||||
| 收集管 | 50 | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 本试剂盒采用新型硅基质膜技术，通过快速简单的结合-洗涤-洗脱步骤即可从大量的 PCR 产物或酶反应液（酶切，连接，探针标记等）中纯化 50 bp-50 kb 的DNA 片段，纯化过程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而获得高纯度，高浓度，完整性好的 DNA 片段，回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1.本实验需要无水乙醇,离心管请自备。 | ||||||||
| 2.本试剂盒可无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒（LY6256, LY6257，LY6258 ）。 | ||||||||
| 3.使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。 | ||||||||
| 4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 3#中加入无水乙醇。 | ||||||||
| 5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。 | ||||||||
| 6.所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1． 样品处理 | ||||||||
| 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | ||||||||
| 1)将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余凝胶部分），放入干净的离心管（自备）中，称取凝胶重量。 | ||||||||
| 注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。 | ||||||||
| 2).向胶块中加入3倍凝胶体积的Buffer 1#；当琼脂糖凝胶浓度>2%时，建议使用6倍凝胶体积的 Buffer 1#（如凝胶重为100mg，其体积可视为100μl，依此类推）。 | ||||||||
| 3)50℃孵育10min，其间不断温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解。 | ||||||||
| 注意：a.在胶充分溶解后检测pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30μl 的3M醋酸钠（pH5.0）将pH值调到5-7 | ||||||||
| b.吸附柱的容积是 700μl，若样品体积大于 700μl 可分批加入。 | ||||||||
| c.胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合 DNA 的能力较弱。 | ||||||||
| 4)可选步骤 当回收片段<500bp或>4kb时，应加入1倍胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀（如凝胶为100mg，则加入100μl异丙醇）。 | ||||||||
| 注意：当回收片段为500bp-4kb时，加入异丙醇不会影响回收率。 | ||||||||
| 从PCR反应液或酶反应液中回收DNA | ||||||||
| 计算PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入5倍PCR反应液或酶反应液体积的 Buffer 1#，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。例如：100 μl的PCR样本中加入500μlBuffer1#（不包括石蜡油或矿物油）。 | ||||||||
| 2.柱平衡：向吸附柱（吸附柱预先装入收集管中）中加入200μl Buffer 2#，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 3．将步骤1中所得溶液加入到吸附柱（吸附柱预先装入收集管中）中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl可分批加入 。 | ||||||||
| 4．向吸附柱中加入650µl Buffer 3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验（例如平末端连接实验或直接测序），建议加入Buffer 3#后静置2-5min再离心。 | ||||||||
| 5．12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 | ||||||||
| 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 | ||||||||
| 6.将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加30-50µl Buffer 4#（pH 8.5），室温放置2min。12,000rpm离心1min，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。 | ||||||||
| 注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。 | ||||||||
| 2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤6。 | ||||||||
| 3）洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。 | ||||||||
| 4）如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。 | ||||||||
| 5）回收大于10kb的DNA片段时，Buffer 4#应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。 | ||||||||