植物 RNA 提取试剂盒参考价： ￥780
价格： ￥702
货品编号： DY6175
规格：
50T
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| 植物 RNA 提取试剂盒 | ||||||||
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RNApure Plant Kit |
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| 离心柱式 | ||||||||
| Cat No:DY6175 | ||||||||
| Kit Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 50preps | |||||||
| Buffer 1# | 35ml | |||||||
| Buffer 2# | 35ml | |||||||
| Buffer 3# | 40ml | |||||||
| Buffer(concentrate) 4# | 11ml | |||||||
| Buffer 5# | 10ml | |||||||
| 过滤柱 | 50 | |||||||
| 离心管 | 50 | |||||||
| 吸附柱 | 50 | |||||||
| 收集管 | 100 | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 室温15℃-25℃干燥条件保存。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 本试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总 RNA，也适用于真菌菌丝 RNA 的提取。独特的 Shredder 分离柱，用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物，同时采用硅基质膜吸附 RNA 进行纯化，使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除，经洗脱的 RNA 可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取 RNA 分子量大于 200 碱基，纯度高，几乎无 DNA 残留。如果是对微量 DNA 非常敏感的 RNA 实验，残留的 DNA 可利用无 RNase 的 DNase I 在柱上进行消化去除。提取的RNA 可用于 Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR 和体外翻译等实验。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 需要自备试剂：：β-巯基乙醇、无水乙醇（新开封或提取RNA专用） | ||||||||
| 2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 | ||||||||
| 3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。 | ||||||||
| 4. 配制溶液应使用无RNase的水。 | ||||||||
| 5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 | ||||||||
| 6. 提取的样品避免反复冻融，否则影响 RNA 提取的量和质量。 | ||||||||
| 7. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer4# 中加入无水乙醇。 | ||||||||
| 8. Buffer 1#在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度为1%。如1 ml Buffer 1#加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer 1#室温可保存1个月。 | ||||||||
| 9. Buffer 1#和 Buffer 2# 如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。 | ||||||||
| 10. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，所有操作步骤动作要迅速。 | ||||||||
| 11. 若下游实验对 DNA 非常敏感，建议用不含 RNase 的 DNase I（货号：LY6060）对 RNA 进行处理。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1. 取植物新鲜组织50-100 mg，加入液氮迅速研磨成粉末。 | ||||||||
| 2. 将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中，加入600 μl Buffer 1#（使用前检查是否加入β-巯基乙醇）或Buffer 2#，涡旋振荡使其充分裂解。 | ||||||||
| 注意：1）Buffer 1#主要成分为异硫氰酸胍，适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织（如玉米的胚乳），由于次级代谢产物较特殊， 异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳，此时可加入Buffer 2#替代Buffer 1#。 | ||||||||
| 2）56℃孵育1-3min有助于组织的裂解，但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。 | ||||||||
| 3. 将步骤2所得全部液体转移至过滤柱（过滤柱应预先装入收集管中）中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2min，将收集管中的上清液转移到一个新的离心管（自备）中。 | ||||||||
| 注意：1）在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样。 | ||||||||
| 2）过滤柱可以除去大部分的碎片，但仍会有小部分流出，离心后会在收集管内形成沉淀，在进行下一步时注意避免吸到沉淀。 | ||||||||
| 4. 在步骤3所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。 | ||||||||
| 注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，但不影响后续试验。 | ||||||||
| 5. 将步骤4得到的溶液全部加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入。10,000 rpm（~11,500×g）离心15s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 6. 向吸附柱中加入700 μl Buffer 3#，10,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 可选步骤：如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验，则用以下步骤替代步 骤6。 | ||||||||
| 1）向吸附柱中加入350 μl Buffer 3#, 10,000 rpm离心15s，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
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2）配制DNase I
混合液：取52 μl Buffer 5#，向其中加入8
μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I（1 U/μl），混匀， 配制成终体积为80 μl 的DNase I混合液。 注意: 以上体系为按照我公司产品DNase I （LY6060）反应体系进行配置，应用其他公司产品请参考相应说明书。 3）向吸附柱中直接加入80 μl DNase I混合液，20-30℃孵育15min。 4）向吸附柱中加入350 μl Buffer 3#, 10,000 rpm离心15s，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
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| 7. 向吸附柱中加入500 μl Buffer 4#（使用前检查是否加入无水乙醇）, 10,000 rpm离心15s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 8. 重复步骤7。 | ||||||||
| 9. 12,000 rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 | ||||||||
| 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。 | ||||||||
| 10. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入30-50 μl Buffer 5#，室温放置1min，10,000 rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。 | ||||||||
| 注意：1） Buffer 5# 体积不应小于 30 μl，体积过小影响回收率。 | ||||||||
| 2） 如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的Buffer 5#重复步骤10。 | ||||||||
| 3） 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤10。 | ||||||||