植物 RNA 提取试剂盒(DNase I)参考价: ¥1160
价格: ¥1044
货品编号: DY6175A
规格:
50T
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植物 RNA 提取试剂盒(DNase I) | ||||||||
RNApure Plant Kit(DNase I) | ||||||||
离心柱式 | ||||||||
Cat No:DY6175A | ||||||||
Kit Size:50T | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents | 50preps | |||||||
DNase I | 1000 U | |||||||
10×Reaction Buffer | 1000μl | |||||||
Buffer 1# | 35ml | |||||||
Buffer 2# | 35ml | |||||||
Buffer 3# | 40ml | |||||||
Buffer(concentrate) 4# | 11ml | |||||||
Buffer 5# | 10ml | |||||||
过滤柱 | 50 | |||||||
离心管 | 50 | |||||||
吸附柱 | 50 | |||||||
收集管 | 100 | |||||||
储运条件 | ||||||||
DNase I、10×Reaction Buffer保存在-20 ℃,其他组分室温15℃-25℃干燥条件保存。 | ||||||||
说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
本试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总 RNA,也适用于真菌菌丝 RNA 的提取。独特的 Shredder 分离柱,用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物,同时采用硅基质膜吸附 RNA 进行纯化,使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除,经洗脱的 RNA 可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取 RNA 分子量大于 200 碱基,纯度高,几乎无 DNA 残留。如果是对微量 DNA 非常敏感的 RNA 实验,残留的 DNA 可利用无 RNase 的 DNase I 在柱上进行消化去除。提取的RNA 可用于 Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR 和体外翻译等实验。 | ||||||||
实验前准备及注意事项 | ||||||||
1. 需要自备试剂::β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用) | ||||||||
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。 |
3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min,用水彻底冲洗后高压灭菌。 | ||||||||
4. 配制溶液应使用无RNase的水。 | ||||||||
5. 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。 | ||||||||
6. 提取的样品避免反复冻融,否则影响 RNA 提取的量和质量。 | ||||||||
7. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer4# 中加入无水乙醇。 | ||||||||
8. Buffer 1#在使用前请加入β-巯基乙醇,至终浓度为1%。如1 ml Buffer 1#加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer 1#室温可保存1个月。 | ||||||||
9. Buffer 1#和 Buffer 2# 如果产生沉淀,请加热使其溶解后室温放置。 | ||||||||
10. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,所有操作步骤动作要迅速。 | ||||||||
操作步骤 | ||||||||
1. 取植物新鲜组织50-100 mg,加入液氮迅速研磨成粉末。 | ||||||||
2. 将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入600 μl Buffer 1#(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或Buffer 2#,涡旋振荡使其充分裂解。 | ||||||||
注意:1)Buffer 1#主要成分为异硫氰酸胍,适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织(如玉米的胚乳),由于次级代谢产物较特殊, 异硫氰酸胍使样品产生沉淀,导致RNA提取效果不佳,此时可加入Buffer 2#替代Buffer 1#。 | ||||||||
2)56℃孵育1-3min有助于组织的裂解,但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。 | ||||||||
3. 将步骤2所得全部液体转移至过滤柱(过滤柱应预先装入收集管中)中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2min,将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。 | ||||||||
注意:1)在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉,便于取样。 | ||||||||
2)过滤柱可以除去大部分的碎片,但仍会有小部分流出,离心后会在收集管内形成沉淀,在进行下一步时注意避免吸到沉淀。 | ||||||||
4. 在步骤3所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇,迅速混匀。 | ||||||||
注意:加入乙醇后可能会产生沉淀,但不影响后续试验。 | ||||||||
5. 将步骤4得到的溶液全部加入到吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入。10,000 rpm(~11,500×g)离心15s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
6. 向吸附柱中加入350 μl Buffer 3#, 10,000 rpm离心15s,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
7. 配制DNase I 混合液:取52 μl Buffer 5#,向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80 μl 的DNase I混合液。 |
8. 向吸附柱中直接加入80 µl DNase I混合液,20-30℃孵育15min。 | ||||||||
9. 向吸附柱中加入350 μl Buffer 3#, 10,000 rpm离心15s,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
10. 向吸附柱中加入500 μl Buffer 4#(使用前检查是否加入无水乙醇), 10,000 rpm离心15s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
11. 重复步骤10。 | ||||||||
12. 12,000 rpm离心2min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 | ||||||||
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。 | ||||||||
13. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入30-50 μl Buffer 5#,室温放置1min,10,000 rpm离心1min,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。 | ||||||||
注意:1) Buffer 5# 体积不应小于 30 μl,体积过小影响回收率。 | ||||||||
2) 如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的Buffer 5#重复步骤13。 | ||||||||
3) 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤13。 |