DNA/RNA 提取试剂盒

DNA/RNA 提取试剂盒
AllPureDNA/RNAKit

离心柱式
Cat No:LY6177
Kit Size:50T



产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	35ml
		Buffer 2#	40ml
		Buffer 3#(concentrate)	11ml
		Buffer 4#	10ml
		Buffer 5#(concentrate)	13ml
		Buffer 6#(concentrate)	15ml
		Buffer 7#	15ml
		吸附柱D	50
		离心管	100
		吸附柱R	50
		收集管	150



储运条件
	室温15℃-25℃干燥条件保存。
说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒可用于从同一细胞或组织样本中同时纯化基因组 DNA 和总 RNA。由于不需要将样本分成两份用于不同的纯化步骤，该试剂盒可最大限度的回收 DNA 和 RNA。纯化的 DNA 和 RNA 被单独洗脱并可直接用于各种下游实验。本试剂盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物质，无需乙醇沉淀，操作简单、快捷。基因组 DNA 可用于 PCR、Real-timePCR、SouthernBlot、DotBlot、比较基因组杂交（CGH）、基因分析和 SNP 分析；总 RNA 可用于 RT-PCR、Real-timeRT-PCR、cDNA 的合成、NorthernBlot、DotBlot 等分析。
实验前准备及注意事项
	1. 需要自备试剂：β-巯基乙醇（新开封或提取 RNA 专用）、70%乙醇（用无 RNase 的水配制）、无水乙醇
	2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

	3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。
	4. 配制溶液应使用Buffer 4#。
	5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
	6. 样品应避免反复冻融，否则影响提取DNA和RNA的质量。样品在Buffer1#中，可于-70℃保存一个月。
	7. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer3#、Buffer5#、Buffer6# 中加入无水乙醇。
	8. Buffer 1#在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度为1%。如1 ml Buffer 1#加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer 1#室温可保存1个月。
	9. Buffer 1#如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
	10. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，所有操作步骤动作要迅速。


操作步骤
	1. 材料处理
	1）贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为107个细胞）, 收集细胞，弃尽培养液，加入600μlBuffer1#（用前检查是否加入β-巯基乙醇），反复吹打使其充分裂解。
	注意：一定要弃尽培养液，否则影响裂解和后续的核酸纯化步骤。
	2）取不大于30mg的动物组织，液氮研磨成细粉末，加入600μlBuffer1#（用前检查是否加入β-巯基乙醇），或直接加入600μlBuffer1#（用前检查是否加入β-巯基乙醇），充分匀浆。
	2. 将上步所得溶液12,000rpm离心3-5min，小心的将上清加入到吸附柱D中(吸附柱D应预先装入收集管中)，12,000rpm离心30-60 s，收集滤液,待提RNA。将吸附柱D放在一个新的2ml收集管中，室温或4℃放置，待提DNA。
	注意：确保吸附柱上没有液体残留，如果有必要可以重复离心，直至所有的液体通过吸附柱D的膜。
	总 RNA 提取
	3. 向步骤2所得滤液中加入1倍体积的70%乙醇（无RNase的水配制），混匀。
	4. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱R中（吸附柱R应预先装入新的收集管中），若一次不能全部加完溶液，可分次转入。12,000rpm离心20s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回2ml收集管中。
	5. 向吸附柱R中加入700 μlBuffer2#,12,000rpm离心20s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱R重新放回2ml收集管中。
	6. 向吸附柱R中加入500 μlBuffer3#（使用前检查是否已加入无水乙醇）,12,000rpm离心20s, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱R重新放回2ml收集管中。

7. 重复步骤6。
8. 12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱R置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤目的是去除吸附柱R中残余的乙醇，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
9. 将吸附柱R置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱R的中间部位悬空加入30-50 μl Buffer 4#，室温放置1min，10,000 rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：1） Buffer 4# 体积不应小于 30 μl，体积过小影响回收率。
2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的Buffer 4#重复步骤9。
3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱R中，重复步骤9。

基因组 DNA 提取
10. 向步骤2的吸附柱D（吸附柱D已放入新的收集管中）中加入500 μlBuffer5#（使用前检查是否加入无水乙醇）, 12,000 rpm 离心 20 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱D放回 2ml 收集管中。
11. 向吸附柱D中加入500μlBuffer6#（使用前检查是否已加入无水乙醇）,12,000rpm离心2min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱D放回收集管中。
12. 12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱D置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱D中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
13. 将吸附柱D置于一个新的无RNase1.5ml离心管中，向吸附柱D的中间部位加入100 μlBuffer 7#，室温放置2-5min，12,000rpm离心2min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：1）BufferGE7#的体积不应小于100 μl，体积过小影响回收率。
2）如果要提高DNA的产量，将100 μl新的Buffer 7#加至吸附柱D上，重复步骤13。
3）如果要提高DNA浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附柱D上，重复步骤13。

吸附柱 D 和吸附柱 R 的规格说明
	规格	吸附柱 D	吸附柱 R
	最大结合能力	100µgDNA	100µgRNA
	最大加样量	700µl	700µl
	结合核酸分子量	DNA15–30kb	RNA>200 核苷酸
	最小洗脱体积	100µ	30µl

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