DNA/RNA/Protein 提取试剂盒

DNA/RNA/Protein 提取试剂盒
AllPureDNA/RNA/ProteinKit
离心柱式
Cat No:DY6178
Kit Size:50T



产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	35ml
		Buffer 2#	40ml
		Buffer 3#(concentrate)	11ml
		Buffer 4#	10ml
		Buffer 5#(concentrate)	13ml
		Buffer 6#(concentrate)	15ml
		Buffer 7#	15ml
		Buffer 8#	60ml
		Buffer 9#	15ml
		吸附柱D	50
		离心管	100
		吸附柱R	50
		收集管	150



储运条件
	室温15℃-25℃干燥条件保存。
说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒适用于从同一细胞或组织样本中同时分离纯化基因组 DNA、总 RNA 和总蛋白。本产品无需将样品分为 3 份来分别提取 DNA，RNA 和蛋白质，也无需先将纯化后的总核酸分为两份后再分别纯化 DNA 和 RNA，因此可最大限度的回收 DNA，RNA 和蛋白质，可以用于小量样品、珍稀样品的核酸和蛋白纯化。纯化后的 DNA、RNA 和蛋白质可被单独洗脱，可直接应用于下游多种分子生物学操作。本试剂盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物质，无需乙醇沉淀，操作简单、快捷。提取的基因组 DNA 可用于 PCR、Real-timePCR、SouthernBlot、DotBlot、比较基因组杂交（CGH）、基因分析和 SNP分析；总 RNA 可应用于 RT-PCR、cDNA 的合成、Nothern Blot、Dot Blot 和基因芯片等实验；总蛋白可应用于电泳和WesternBlot 等。

实验前准备及注意事项
	1. 需要自备试剂：β-巯基乙醇（新开封或提取 RNA 专用）、70%乙醇（用无 RNase 的水配制）、无水乙醇
	2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
	3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。
	4.配制溶液应使用无RNase的水。
	5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
	6.. 样品应避免反复冻融，否则影响提取DNA、RNA和蛋白质的质量。样品在Buffer1#中，可于-70℃保存一个月。
	7. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer3#、Buffer5#、Buffer6# 中加入无水乙醇。
	8. Buffer 1#在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度为1%。如1 ml Buffer 1#加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer 1#室温可保存1个月。
	9. Buffer 1#如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
	10. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，所有操作步骤动作要迅速。


操作步骤
	1. 材料处理
	1）贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为107个细胞）, 收集细胞，弃尽培养液，加入600μlBuffer1#（用前检查是否加入β-巯基乙醇），反复吹打使其充分裂解。
	注意：一定要弃尽培养液，否则影响裂解和后续的核酸纯化步骤。
	2）取不大于30mg的动物组织，液氮研磨成细粉末，加入600μlBuffer1#（用前检查是否加入β-巯基乙醇），或直接加入600μlBuffer1#（用前检查是否加入β-巯基乙醇），充分匀浆。
	2. 将上步所得溶液12,000rpm离心3-5min，小心的将上清加入到吸附柱D中(吸附柱D应预先装入收集管中)，12,000rpm离心30-60 s，收集滤液,用于提取总RNA。将吸附柱D放在一个新的2ml收集管中，室温或4℃放置，待提DNA。
	注意：确保吸附柱上没有液体残留，如果有必要可以重复离心，直至所有的液体通过吸附柱D的膜。
	总 RNA 提取
	3. 向步骤2所得滤液中加入1倍体积的70%乙醇（无RNase的水配制），混匀。
	4. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱R中（吸附柱R应预先装入新的收集管中），若一次不能全部加完溶液，可分次转入。12,000rpm离心20s，保留收集管中的液体，用于蛋白提取。

	5. 向吸附柱R中加入700 μlBuffer2#,12,000rpm离心20s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱R重新放回2ml收集管中。
	6. 向吸附柱R中加入500 μlBuffer3#（使用前检查是否已加入无水乙醇）,12,000rpm离心20s, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
	7. 重复步骤6。
	8. 12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱R置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：此步骤目的是去除吸附柱R中残余的乙醇，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

	9. 将吸附柱R置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱R的中间部位悬空加入30-50 μl Buffer 4#，室温放置1min，10,000 rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
	注意：1） Buffer 4# 体积不应小于 30 μl，体积过小影响回收率。
	2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的Buffer 4#重复步骤9。
	3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱R中，重复步骤9。

	基因组 DNA 提取
	10. 向步骤2的吸附柱D（吸附柱D已放入新的收集管中）中加入500 μlBuffer5#（使用前检查是否加入无水乙醇）, 12,000 rpm 离心 20 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱D放回 2ml 收集管中。
	11. 向吸附柱D中加入500μlBuffer6#（使用前检查是否已加入无水乙醇）,12,000rpm离心2min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱D放回2ml收集管中。
	12. 12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱D置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱D中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
	13. 将吸附柱D置于一个新的无RNase1.5ml离心管中，向吸附柱D的中间部位加入100 μlBuffer 7#，室温放置2-5min，12,000rpm离心2min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
	注意：1）Buffer7#的体积不应小于100 μl，体积过小影响回收率。
	2）如果要提高DNA的产量，将100 μl新的Buffer 7#加至吸附柱D上，重复步骤13。
	3）如果要提高DNA浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附柱D上，重复步骤13。

蛋白质提取
14. 在提取 RNA 流出液（即步骤 4 所得滤液）中加入 1 倍体积的 Buffer8#，充分混匀，室温放置 10-30 min。
15. 12,000rpm离心10min，弃上清。
16. 加入500 μl70%乙醇，12,000rpm离心1min，尽可能吸尽上清。
17. 将离心管置于室温数分钟，以晾干沉淀。
注意：这一步的目的是将残余的乙醇去除，过分干燥会使蛋白沉淀难于溶解，干燥不彻底残留的乙醇会影响蛋白上样。
18. 加入100 μlBuffer9#，得到蛋白溶液。
注意：1）采用Buffer9#溶解得到的蛋白样品适用于SDS-PAGE和Western Blot检测，但不适用于Bradford方法进行蛋白定量，如需采用Bradford方法进行蛋白定量可采用5%SDS溶解蛋白，或根据下游试验选择合适的蛋白溶解缓冲液。
2）加入溶解蛋白缓冲液的量根据初始样本量及下游试验具体要求来确定。
3）溶解的蛋白可置于-20℃保存数月，置于2-8℃保存数天。
蛋白样品如需进行SDS-PAGE电泳可进行如下操作：
19. 蛋白样品中加入蛋白LoadingBuffer，95℃变性5-10min，将样品冷却至室温。
20. 12,000rpm离心1min，吸取上清液进行下游的SDS-PAGE或Westernblot等试验。


吸附柱 D 和吸附柱 R 的规格说明
	规格	吸附柱 D	吸附柱 R
	最大结合能力	100µgDNA	100µgRNA
	最大加样量	700µl	700µl
	结合核酸分子量	DNA15–30kb	RNA>200 核苷酸
	最小洗脱体积	100µ	30µl

咨询类型：	商品咨询
咨询内容：
联系方式：
*验证码：

全部商品分类

新闻公告

关于德元

德元动态

企业文化

代理商信息

购物指南

全部商品分类

新闻公告

DNA/RNA/Protein 提取试剂盒

关于德元

德元动态

企业文化

代理商信息

购物指南

DNA/RNA/Protein 提取试剂盒