细菌 RNA 提取试剂盒参考价: ¥780
价格: ¥702
货品编号: LY6179
规格:
50T
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细菌 RNA 提取试剂盒 | ||||||||
RNApure Bacteria Kit | ||||||||
离心柱式 | ||||||||
Cat No:LY6179 | ||||||||
Kit Size:50T | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents | 50preps | |||||||
Buffer 1# | 35ml | |||||||
Buffer 2# | 40ml | |||||||
Buffer(concentrate) 3# | 11ml | |||||||
Buffer 4# | 10ml | |||||||
过滤柱 | 50 | |||||||
离心管 | 50 | |||||||
吸附柱 | 50 | |||||||
收集管 | 100 | |||||||
储运条件 | ||||||||
本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输,室温15℃-25℃的干燥条件保存。 | ||||||||
说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总 RNA,30-40 min即可完成反应。提取的总 RNA 纯度高,没有蛋白质和其他污染,如果是对微量 DNA 非常敏感的 RNA 实验,残留的 DNA 可利用无 RNase 的 DNase I 在柱上进行消化去除。提取的 RNA 适用于 RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。 | ||||||||
实验前准备及注意事项 | ||||||||
1.本实验需要无水乙醇、Lysozyme(LY5018)、TE缓冲液、β-巯基乙醇,请自备。 | ||||||||
2.玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10min,用水彻底冲洗后高压灭菌。 | ||||||||
3.使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。 | ||||||||
4.配制溶液应使用无RNase的水。 | ||||||||
5.操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套 | ||||||||
6.提取的样品避免反复冻融,否则影响 RNA 提取的量和质量 | ||||||||
7.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer 3# 中加入无水乙醇。 | ||||||||
8.使用前请检查 Buffer 1# 是否出现结晶或者沉淀,可置于 56℃水浴重新溶解。Buffer 1#在使用前请加入β-巯基乙醇,至终浓度为 1%。如 1 ml Buffer 1# 加 10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的 Buffer 1# 室温可保存 1 个月。 | ||||||||
9.所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。 |
10.若下游实验对 DNA 非常敏感,建议用不含 RNase 的 DNase I(Cat No:LY6060)对 RNA 进行处理。 | ||||||||
操作步骤 | ||||||||
1. 4℃ 10,000 rpm(~13,400×g)离心2min收集菌体(菌体量最大不超过1×109),小心去除所有上清。 | ||||||||
注意:上清如果有残留,会影响后续的消化过程。 |
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2. 用含有Lysozyme的100 μl TE缓冲液彻底重悬菌体,室温孵育。具体配方和孵育时间如下: | ||||||||
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TE 缓冲液中 Lysozyme 的终浓度 孵育时间 | |||||||
G-细菌 400 μg/ml 3-5min | ||||||||
G+细菌 3 mg/ml 5-10min | ||||||||
3. 加入350 μl Buffer 1#(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇),涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)。将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中,10,000 rpm离心2min,收集滤液,弃掉过滤柱。 | ||||||||
4. 向上步得到的滤液中加入250 μl无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入到吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
5.向吸附柱中加入700 μl Buffer 2#,10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
可选步骤:如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验,则用以下步骤替代步骤5。 |
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1)向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#,10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
2)配制DNase I
混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8 μl 10 × Reaction Buffer 和20 μl DNase I(1
U/μl),混匀, 配制成终体积为80 μl的反应液。 注意: 以上体系为按照我公司产品DNase I (Cat No:LY6060)反应体系进行配置,应用其他公司产品请参考相应说明书。 |
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3)向吸附柱中直接加入80 µl DNase
I 混合液,20-30℃孵育15min。 |
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4)向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#, 10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
6. 向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#(使用前检查是否加入无水乙醇), 10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
7. 重复步骤6。 |
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8. 12,000 rpm 离心 2 min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 | ||||||||
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。 | ||||||||
9. 将吸附柱置于一个新的无RNase的离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50 μl Buffer 4#室温放置1min,10,000 rpm离心1min,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。 |
注意:1) Buffer 4# 体积不应小于
30 μl,体积过小影响回收率。 |
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2) 如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的Buffer 4#重复步骤9。 |
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3) 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤9。 |