TRIzol 总RNA提取试剂参考价： ￥180
价格： ￥140
货品编号： DY6151
规格：
25ml
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| TRIzol 总RNA提取试剂 | ||||||||
| TRIzol Reagent | ||||||||
| Cat No：DY6151 | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 25T | 50T | ||||||
| trizol | 25ml | 100ml | ||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂保存在2-8℃，避光。保质期一年 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| TRIzol 是广谱型中RNA提取试剂。操作简单方便，颜色鲜明，利于分层。广泛应用于植物材料、动物组织、细胞及各种微生物等样品中提取中RNA.本试剂能够提取完整的RNA。加入氯仿离心后，溶液分为三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在RNA 分布在上层水相中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总 RNA。提取的总 RNA 完整性好，无蛋白和 DNA 污染，可用于各种分子生物学常规实验，如 RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、DotBlot、体外翻译等。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 本实验需要无水乙醇、氯仿、异丙醇、离心管、75%酒精等请自备。 | ||||||||
| 2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 | ||||||||
| 3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。 | ||||||||
| 4. 配制溶液应使用无RNase的水。 | ||||||||
| 5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 | ||||||||
| 6. 提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。 | ||||||||
| 7. 本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。 | ||||||||
| 8.样品用 TRIzol匀浆后，如不即刻加入氯仿，置于-70℃下可放置一个月 以上。 | ||||||||
| 9. 保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成 cDNA，NorthernBlot 等。 | ||||||||
| 10. 若下游实验对 DNA 非常敏感，建议用不含 RNase 的 DNaseI（货号：LY6060）对 RNA 进行处理。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1.样品处理： | ||||||||
| 1）动物组织：取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，每30-50mg组织加入1mlTRIzol，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzol1ml混匀。 | ||||||||
| 2) 植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzol中迅速研磨，每30-50mg 组织加入1mlTRIzol，混匀。 | ||||||||
| 3) 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量TRIzol（每10cm2面积1mlTRIzol），反复吹打使细胞裂解。如果TRIzol的量不足可能导致RNA中有DNA污染。 | ||||||||
| 4）细胞悬液：不洗涤细胞，直接离心收集细胞。每5×106－1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1mlTRIzol。 | ||||||||
| 可选步骤：当样品富含蛋白质，脂肪，多糖或是细胞外物质例如肌肉，脂肪组织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8°C的条件下以12,000×g的离心力离心10min，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，而RNA存在于上清中。对于脂肪组织的样品中，大量的脂肪漂在最上层也应该除掉。吸取上清备用。 | ||||||||
| 2.将匀浆样品反复吹打几次，在室温条件下静置5min，使蛋白核酸复合物完全分离。 | ||||||||
| 3.向以上溶液中加入氯仿，每使用1mlTRIzon加入0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15s，室温放置2-3min。 | ||||||||
| 4. 4℃ 12,000 rpm离心15min，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相（约600μl）转移到一个新的离心管（自备）中。 | ||||||||
| 6. 4℃ 12,000rpm 离心10min，弃上清。 | ||||||||
| 7.加入75%乙醇（用无RNase的水配制）洗涤沉淀。每使用1mlTRIzol用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤一次。 | ||||||||
| 8． 4℃ 12,000rpm离心3min，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。 | ||||||||
| 注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。 | ||||||||
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9. 室温放置3-5min，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。 注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。 |
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