鼠尾基因组DNA提取试剂盒

鼠尾基因组 DNA 提取试剂盒
TailGenDNAKit
离心柱式
Cat No:LY6029
Kit Size:50T


产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	15ml
		Buffer 2#	15ml
		Buffer 3#(concentrate)	13ml
		Buffer 4#(concentrate)	15ml
		Buffer 5#	15ml
		Buffer 6#	1ml
		离心管	50
		吸附柱	50
		收集管(2ml)	50

储运条件
	本试剂盒中Buffer 6#保存在-20℃，可保存12个月。其它组分室温（15-25℃）条件下可保存12个月，更长时间保存可置于2-8℃。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	德元国际开发了适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度总 DNA的试剂盒。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需苯酚或氯仿抽提，可获得最大为 50kb 的 DNA 片段，同时对 100bp 的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的 DNA 高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的 DNA。纯化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、Real-TimePCR、文库构建、SouthernBlot、分子标记等下游实验。
实验前准备及注意事项
	1. 本实验需要无水乙醇，请自备。
	2. Buffer 6#勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
	3. 全部离心步骤可在室温下进行。
	4.使用前请检查 Buffer 2# 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer 2# 于 56℃水浴孵育恢复澄清。
	5. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 3#和Buffer 4#中加入无水乙醇。
	6. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。

操作步骤
	1．取一段大鼠或两段小鼠长度为 0.4-0.6 厘米的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管（自备）中。加入 180 μlBuffer1#，振荡混匀。
	注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围
	2．加入20 μl Buffer 6#，立即涡旋震荡15秒，充分混匀。
	3. 置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6-8h，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
	注意：1）如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20μlBuffer 6#消化，不会影响后续操作。
	2)如需无RNA污染的基因组DNA，可加入4 μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液（Cat No:LY5012），震荡混匀。
	4． 14,000rpm(~20,000×g)离心 1 min，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管（自备）中。
	5. 加入200μlBuffer2#，涡旋震荡，充分混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
	注意：1）加入Buffer2#和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
	2）如果多个样品一起操作，Buffer2#和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
	3）加入Buffer2#和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
	6．将步骤 5 所得溶液全部加入吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次最多不超过700 μl，可分多次转入。10,000 rpm（～11,500×g）离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	7. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	8. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000rpm离心3min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
	9. 12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
	10. 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50 -200μl Buffer 5# 或灭菌水，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
	注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
	2）离心之前室温孵育5min可以增加产量。
	3）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer5#洗脱并于-20℃保存。

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