复杂植物基因组DNA提取试剂盒参考价： ￥450
价格： ￥405
货品编号： LY6031
规格：
50T
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| 复杂植物基因组DNA提取试剂盒 | ||||||||
| SurePlant DNA Kit | ||||||||
| 离心柱式 | ||||||||
| Cat No:LY6031 | ||||||||
| Kit Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 50preps | |||||||
| Buffer 1# | 40ml | |||||||
| Buffer 2# | 18ml | |||||||
| Buffer 3#(concentrate) | 30ml | |||||||
| Buffer 4#(concentrate) | 17ml | |||||||
| Buffer 5# | 30ml | |||||||
| Buffer 6# | 230μl | |||||||
| 过滤柱 | 50 | |||||||
| 吸附柱 | 50 | |||||||
| 收集管(2ml) | 50 | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂盒室温（15-25℃）条件下可保存12个月，更长时间保存可置于2-8℃。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 本试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及叶绿体DNA，特别适用于多糖、多酚含量高的的植物组织。本品无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提以及乙醇沉淀，可以处理多至100 mg的样本，纯化获得最大为50 kb的DNA片段。德元国际研制的独特过滤柱可最大限度的去除植物组织中的糖、多酚等物质，通过优化的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到硅胶膜吸附柱上，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA产量高，纯度好，可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 本实验需要无水乙醇，请自备。 | ||||||||
| 2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。 | ||||||||
| 3. 全部离心步骤可在室温下进行。 | ||||||||
| 4.使用前请检查 Buffer 1# ，Buffer 2#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer 1# ，Buffer 2# 于 56℃水浴孵育恢复澄清。 | ||||||||
| 5. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 3#和Buffer 4#中加入无水乙醇。 | ||||||||
| 6. 所使用的植物样本不超过100 mg湿重，20 mg干重。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1．取植物新鲜组织约100mg或干重组织约20mg，加入液氮充分研磨。 | ||||||||
| 2．将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中，加入400 μl Buffer 1#和4 μl Buffer 6#，涡旋振荡1min，使其充分裂解。 | ||||||||
| 注意：1）使用涡旋振荡或移液器吹打，充分裂解组织，组织裂解不完全会影响最终的DNA得率。 | ||||||||
| 2）请勿在使用前将Buffer1#与 Buffer 6#混合。 | ||||||||
| 3. 65℃孵育10min，期间涡旋混匀2-3次。 | ||||||||
| 4．加入130 μl Buffer 2#，混匀，冰上孵育5min。 | ||||||||
| 5. 14,000 rpm（~20,000×g）离心5min。 | ||||||||
| 注意：一些植物材料裂解后会出现粘稠的现象，可能导致下一步的DNA剪切，在这种情况下，可以通过离心的方法移除沉淀物。离心后吸取上清进行步骤7。 | ||||||||
| 6. 将所得溶液全部加入过滤柱中(过滤柱应预先装入收集管中)，14000 rpm离心2 min，将滤液转移到一个新的离心管中，弃掉收集管。 | ||||||||
| 注意：1）在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样。 | ||||||||
| 2）过滤柱可以除去大部分的碎片，但仍会有小部分流出，离心后会在收集管内形成沉淀，在进行下一步时注意避免吸到沉淀。 | ||||||||
| 7． 加入1.5倍体积的Buffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），充分混匀。 | ||||||||
| 注意：加入Buffer 3#后应立即混匀，可能会产生沉淀但不影响后续试验。 | ||||||||
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8. 将步骤7中所得溶液全部加入吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次 最多不超过700 μl，可分多次转入。10,000 rpm（～11,500×g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
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| 10. 向吸附柱中加入500 μl Buffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000 rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 11. 重复步骤7. | ||||||||
| 12. 12,000rpm离2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 | ||||||||
| 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。 | ||||||||
| 13. 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μl Buffer 5# ，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。 | ||||||||
| 注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。 | ||||||||
| 2）离心之前室温孵育5min可以增加产量。 | ||||||||
| 3）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer5#洗脱并于-20℃保存。 | ||||||||
| 4）如果要提高DNA的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存。 | ||||||||
| 5)为了增加产量可以再次加入50-100μl Buffer 5# ，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液。 | ||||||||