基因组提取试剂盒

通用型柱式基因组提取试剂盒
UniversalGen DNA Kit
离心柱式
Cat No:LY6011
Kit Size:50T

产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	15ml
		Buffer 2#	15ml
		Buffer 3#(concentrate)	13ml
		Buffer 4#(concentrate)	15ml
		Buffer 5#	15ml
		Buffer 6#	1ml
		吸附柱	50
		收集管(2ml)	50

储运条件
	本试剂盒中Buffer 6#需要-20℃保存，其他组分室温（15-25℃）条件下可保存12个月，更长时间保存可置于2-8℃。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织、细胞、血液、细菌等多种样品中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量最大为50 kb的DNA片段，纯化过程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
实验前准备及注意事项
	1. 本实验需要无水乙醇，Enzymatic Lysis Buffer（提取革兰氏阳性菌基因组DNA时须准备）,请自备。
	2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。
	3. 全部离心步骤可在室温下进行。
	4.使用前请检查 Buffer 1# ，Buffer 2#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer 1# ，Buffer 2# 于 56℃水浴孵育恢复澄清。
	5. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 3#和Buffer 4#中加入无水乙醇。

	6. 如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组，建议在对数生长期早期收集样品。
	7. Buffer 6#勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
操作步骤
	动物组织基因组提取
	1．如果提取材料为动物组织，取25 mg（脾组织用量应少于10 mg）；
	如果材料为鼠尾，取一段长度为0.4-0.6 cm的大鼠鼠尾或两段长度为0.4-0.6 cm的小鼠鼠尾。
	样本进行液氮研磨或切成小块后置于1.5 ml离心管中，加入180 μl Buffer 1#，将不同样品做好标记。
	注意：1）确保各组织的量不要超出推荐范围。
	2）若使用匀浆器处理样本，匀浆前向样本中加入不超过80 μl Buffer 1#，匀浆后加入 100 μl Buffer 1#。
	2．加入20 μl Buffer 6#，涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃水浴，直至组织完全裂解，孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。
	注意：1）不同组织消化时间不同，通常1-3h即可完成，鼠尾需要消化6-8h，必要时过夜消化，不会影响后续操作。
	2）如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，延长56℃孵育时间或再加入20 μl Buffer 6#消化
	3）如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4 μl的浓度为100 mg/ml的RNase A溶液（货号：LY5012），涡旋15s，室温放置5-10min。
	3．加入200 μl Buffer 2#，涡旋震荡充分混匀，70℃水浴10min。短暂离心后加入200 μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
	注意：1）加入Buffer 2#和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
	2）加入Buffer 2# 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织（如脾，肺）在加入Buffer 2#和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
	4．短暂离心，将步骤3所得溶液全部加入到吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次最多不超过700 μl，可分多次转入。6,000×g（～8,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	5．向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），6,000×g 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	6．向吸附柱中加入500 μl Buffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），16,200×g （~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤6

	7．16,200×g离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR等）。
	8．将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer 5#或灭菌水，室温放置2-5min，16,200×g离心1min，收集DNA溶液，-20 ℃保存DNA。
	注意： 1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
	2）Buffer 5#在65-70℃水浴预热，离心之前室温孵育5min可以增加产量；用另外的50-200 μl Buffer 5#或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
	3）如果要提高DNA的终浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5min，16,200×g 离心1min；若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer 5#或灭菌水洗脱。
	4）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer 5#洗脱并于-20℃保存。


	血液及细胞样本基因组提取
	1．取1.5 ml或2 ml离心管，向管底部加入20 μl Buffer 6#。
	2．材料处理
	1)如果提取材料为哺乳动物抗凝血液（无细胞核红细胞），可直接向50-200 μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入Buffer 1#补足至200 μl；
	2)如果提取材料为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，取 5-10 μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品，加入Buffer 1#补足至200 μl；
	3)贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为5×106个细胞），400×g（2,000 rpm）离心5min，弃尽上清，加200 μl 1#，振荡至样品彻底悬浮；
	注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4 μl的浓度为100 mg/ml的RNase A溶液（货号：LY5012），涡旋15s，室温放置5-10min。
	3．加入200 μl Buffer 2#，涡旋震荡充分混匀，56℃水浴10min。
	4．短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入200 μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心。
	注意：1）加入Buffer 2#和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
	2）加入Buffer 2#和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织在加入Buffer 2#和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。

	5. 短暂离心，将步骤4所得溶液全部加入到吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次最多不超过700 μl，可分多次转入。6,000×g（～8,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	6．向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），6,000×g 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	7．向吸附柱中加入500 μl Buffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），16,200×g （~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7
	8．16,200×g离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR等）。
	9．将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer 5#或灭菌水，室温放置2-5min，16,200×g离心1min，收集DNA溶液，-20 ℃保存DNA。
	注意： 1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
	2）Buffer 5#在65-70℃水浴预热，离心之前室温孵育5min可以增加产量；用另外的50-200 μl Buffer 5#或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
	3）如果要提高DNA的终浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5min，16,200×g 离心1min；若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer 5#或灭菌水洗脱。
	4）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer 5#洗脱并于-20℃保存。

	细菌基因组提取
	1．细菌样本预处理
	A 革兰氏阴性菌
	（1）取细菌培养物1-5 ml（106-108个细胞，最多不超过2×109个细胞）置于离心管（自备）中，11,500×g（~10,000 rpm）离心1min，尽量吸净上清。
	（2）向沉淀中加入180 μl Buffer 1#，振荡使菌体重悬。
	（3）加入20 μl Buffer 6#，涡旋混匀，56℃孵育，直至菌体完全裂解，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
	注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4 μl的浓度为100 mg/ml的RNase A溶液（货号：LY5012），涡旋15s，室温放置5-10min。
	（4）加入200 μl Buffer 2#，涡旋震荡混匀。

	B 革兰氏阳性菌
	（1）取细菌培养物1-5 ml（106-108个细胞，最多不超过2×109个细胞）置于离心管（自备）中，11,500×g离心1min，尽量吸净上清。
	（2）加入180 μl Enzymatic Lysis Buffer（自备）使菌体重悬。
	（3）37℃孵育30min。
	（4）加入20 μl Buffer 2#涡旋震荡，充分混匀。加入200 μl Buffer 2#，涡旋震荡混匀。56℃孵育30min。
	注意： 1）如果需要，95°C孵育15min可以使病原体失活，但是95°C孵育会造成一些DNA的降解。
	2)如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4 μl的浓度为100 mg/ml的RNase A溶液（货号：LY5012），涡旋15s，室温放置5-10min。
	2．加入200 μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
	注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
	3. 将步骤2所得溶液全部加入到吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次最多不超过700 μl，可分多次转入。6,000×g（～8,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	4．向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），6,000×g 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	5．向吸附柱中加入500 μl Buffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），16,200×g （~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤5。
	6．16,200×g离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR等）。
	7．将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer 5#或灭菌水，室温放置2-5min，16,200×g离心1min，收集DNA溶液，-20 ℃保存DNA。
	注意： 1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
	2）Buffer 5#在65-70℃水浴预热，离心之前室温孵育5min可以增加产量；用另外的50-200 μl Buffer 5#或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
	3）如果要提高DNA的终浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5min，16,200×g 离心1min；若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer 5#或灭菌水洗脱。
	4）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer 5#洗脱并于-20℃保存。

咨询类型：	商品咨询
咨询内容：
联系方式：
*验证码：

全部商品分类

新闻公告

关于德元

德元动态

企业文化

代理商信息

购物指南