SDS裂解液参考价： ￥180
价格： ￥162
货品编号： DY7008
规格：
100ml
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| SDS 裂解液 | ||||||||
| SDS Lysis Buffer | ||||||||
| Cat No:DY7008 | ||||||||
| Size:100ml | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents |
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DY7003A | ||||||
| SDS 裂解液 | 100 ml | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本产品-20℃ 保存。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
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SDS 裂解液(SDS Lysis
Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀，chromatin
immunoprecipitation)等实验。SDS 裂解液的主要成分为 50mM Tris(pH8.1)，1% SDS，以及 2mM sodium
pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。 SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒（LY7052）测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 |
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| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 | ||||||||
| 2．为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。 | ||||||||
| 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 一、培养细胞样品 | ||||||||
| 1. 融解 SDS 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。 | ||||||||
| 2.1对于贴壁细胞： | ||||||||
| 去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。 通常裂解液接触细胞 1-2 s后,细胞就会被裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 min。 | ||||||||
| 2.2对于悬浮细胞： | ||||||||
| 离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需将细胞分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 min。 | ||||||||
| 3. 充分裂解后，10000-14000×g 离心 3-5 min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。 | ||||||||
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注意：对于裂解液的用量，通常 6
孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 μl 或 250 μl。如果用于 ChIP，建议 6 孔板每孔细胞至少加入 200μl 裂解液。 |
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| 二、组织样品： | ||||||||
| 1. 把组织剪切成细小的碎片。 | ||||||||
| 2. 融解 SDS 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。 | ||||||||
| 3. 按照每 20 mg 组织加入150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。 | ||||||||
| 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 min。 | ||||||||
| 5. 充分裂解后，10000-14000×g 离心 3-5 min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。 | ||||||||
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注意：若组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。10000-14000×g
离心 3-5 min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP
等操作。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充 分。 |
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