RIPA裂解液(中)

RIPA裂解液（中）
RIPA Lysis Buffer
Cat No:DY7020
Size:100ml

产品组分
		组分 Contents	LY7020
		RIPA裂解液	100ml

储运条件
	4℃保存。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。经RIPA裂解液（中）提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。　　RIPA裂解液（中）的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
实验前准备及注意事项
	1．为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
	2．使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如：LY7052 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
	3．建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：LY7150 蛋白酶抑制剂混合物，LY7151 磷酸酶抑制剂混合物。
	4．若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
	5．对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
	6．对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液，以此类推。

操作步骤
	一、细胞样品贴壁细胞蛋白抽提
	1．小心倾去贴壁细胞的培养液。
	2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的 PBS漂洗细胞。
	3．加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂），试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。
		表 1 贴壁细胞 RIPA 裂解液使用量推荐表
		细胞培养板类型或培养面积	裂解液使用量
		100 mm *	500-1,000 µl
		60 mm	250-500 µl
		6 孔培养板	200-400 µl /孔
		24 孔培养板	100-200 µl /孔
		96 孔培养板	50-100 µ l /孔
	* 对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白（细胞类型不同略有差异）。
	4．将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
	5．14,000×g离心10min。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
	悬浮细胞蛋白提取
	1．悬浮细胞2,500×g，离心5min，弃去上清。
	2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5min，弃去上清。
	3．加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂），每5×106 细胞加入约200-500 µl RIPA裂解液，吹打均匀。
	4．冰上放置20min，使细胞充分裂解。
	5．14,000×g离心10min。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

	二、组织样品
	1．取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂。
	2．称量实验组织的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
	3．冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
	4．14,000×g 离心10min。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
	注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

表2 蛋白裂解液性能、参数比较
目录号	LY7001	LY7020	LY7021
产品名称	RIPA裂解液（强）	RIPA裂解液（中）	RIPA裂解液（弱）
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1% sodium deoxycholate， 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5% sodium deoxycholate， 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25% sodium deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
膜蛋白提取	很好	较好	一般
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP

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