RIPA裂解液(强)参考价: ¥185
价格: ¥166
货品编号: DY7001
规格:
100ml
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RIPA裂解液(强) | ||||||||
RIPA Lysis Buffer | ||||||||
Cat No:DY7001 | ||||||||
Size:100ml | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents | LY7001 | |||||||
RIPA裂解液 | 100ml | |||||||
储运条件 | ||||||||
4℃保存。 | ||||||||
说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类,具体特点和差异请参考附表2,可根据实验需求选择相应产品。RIPA裂解液(强)可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白,提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。 RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可有效抑制蛋白降解。 |
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实验前准备及注意事项 | ||||||||
1.为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。 | ||||||||
2.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品,可采用BCA法进行蛋白定量,以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购,如:LY7052 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂,不能用Bradford法进行蛋白定量。 | ||||||||
3.建议在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,以防止蛋白降解,或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购,如:LY7150 蛋白酶抑制剂混合物,LY7151 磷酸酶抑制剂混合物。 | ||||||||
4.若需获得更高浓度的蛋白,应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。 | ||||||||
5. 对于培养瓶中的贴壁细胞,推荐先使用常规方法消化细胞,再参考悬浮细胞蛋白提 取步骤操作。 | ||||||||
6.对于离心获得的细胞,若不确定细胞体积,可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液,以此类推。 |
操作步骤 | ||||||||
一、细胞样品 贴壁细胞蛋白抽提 |
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1.小心倾去贴壁细胞的培养液。 | ||||||||
2.可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请先使用预冷的 PBS漂洗细胞。 | ||||||||
3.加入适量RIPA裂解液(使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂),试剂使用量请参考附表1,在冰上用枪头吹打贴壁细胞。 | ||||||||
表 1 贴壁细胞 RIPA 裂解液使用量推荐表 | ||||||||
细胞培养板类型或培养面积 | 裂解液使用量 | |||||||
100 mm * | 500-1,000 µl | |||||||
60 mm | 250-500 µl | |||||||
6 孔培养板 | 200-400 µl /孔 | |||||||
24 孔培养板 | 100-200 µl /孔 | |||||||
96 孔培养板 | 50-100 µ l /孔 | |||||||
* 对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白(细胞类型不同略有差异)。 | ||||||||
4.将裂解液转移至新的离心管中,冰上孵育20min,使细胞充分裂解。 | ||||||||
5.14,000×g离心10min。转移上清液至新管中,进行下一步分析。 | ||||||||
悬浮细胞蛋白提取 | ||||||||
1.悬浮细胞2,500×g,离心5min,弃去上清。 | ||||||||
2.可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5min,弃去上清。 | ||||||||
3.加入适量RIPA裂解液(使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂),每5×106细胞加入约200-500 µl RIPA裂解液,吹打均匀。 | ||||||||
4.冰上放置20min,使细胞充分裂解。 | ||||||||
5.14,000×g离心10min。转移上清液至新管中,进行下一步分析。 | ||||||||
二、组织样品 | ||||||||
1.取适当的RIPA裂解液,在使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂。 | ||||||||
2.称量实验组织的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片,用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。 | ||||||||
3.冰上孵育20min,使细胞充分裂解。 | ||||||||
4.14,000×g 离心10min。转移上清液至新管中,进行下一步分析。 | ||||||||
注:RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为基因组。 |
表2 蛋白裂解液性能、参数比较 | ||||||||
目录号 | LY7001 | LY7020 | LY7021 | |||||
产品名称 | RIPA裂解液(强) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | |||||
有效裂解成分 |
1%Triton
X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS |
1%
NP-40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% SDS |
1%
NP-40, 0.25% sodium deoxycholate |
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裂解强度 | 强 | 中 | 温和 | |||||
膜蛋白提取 | 很好 | 较好 | 一般 | |||||
胞浆蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | |||||
核蛋白提取 | 很好 | 较好 | 较好 | |||||
主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,CO-IP | |||||