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BCA蛋白定量试剂盒

参考价:  265
价格:  ¥230
货品编号:  DY7052
规格:   500T
 



BCA蛋白定量试剂盒
BCA Protein Assay Kit
Cat No:DY7052
 Size:500T
产品组分
组分 Contents 500 次/微孔,50 次/试管
试剂A 100 ml
试剂B 3ml
标准品(2mg/ml 2 ml 
储运条件
标准品2-8℃保存,其它组分室温保存。
说    明
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
    BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCABicin -choninic Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液,测定范围为202000 μg/ml
实验前准备及注意事项
1.本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
2.建议每次测定蛋白样品时,绘制标准曲线,以获得准确数据。
3.BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
4.完成37℃孵育30min或室温孵育2h后,须在3-5min内完成检测,否则会影响蛋白定量的准确度。
5.如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1),可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(DY7055)或其他蛋白定量产品。 
                         附表1. 干扰物质表
化合物 耐受浓度 化合物 耐受浓度
缓冲液 去垢剂和变性剂 
乙酸盐 0.2M  Brij35 1%
甘氨酸 1M  CHAPS 1%
HEPES 0.1M 盐酸胍 4M 
MES  50mM NP-40 1%
MOPS  50mM 辛葡糖 1%
Na+-柠檬酸  <1mM SDS 1%
PIPES 50mM Triton X-100 1%
磷酸钠  0.1M 糖类
乙酸钠 0.2M pH 5.5  葡萄糖  10mM
TES 50mM 蔗糖  1M 
Tris 0.1M  螯合剂 
盐类  EDTA 10mM
硫酸铵  干扰  还原剂
NaCl 1M  β-巯基乙醇 50μM 
尿素  3M DTT 1mM
极性化合物 其他 
DMSO 5% 脂类  干扰
甘油 10% HCl/NaOH 0.1M
操作步骤
1.稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
管号  稀释液用量(μl)  BSA标准品
用量(μl) 
BSA标准品最终浓
度(μg/μl) 
A 0 100 2
B 200 200 1
C 200 200(从B管中取) 0.5
D 200 200(从C管中取) 0.25
E 200 200(从D管中取)  0.125
F 200 200(从E管中取)  0.0625
G 200 0 0(空白)
2.配置BCA工作液:
  1)计算BCA工作液总量:
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例:BSA标准品样本个数为7个,未知样本个数2个,复孔数3个。
   试管检测法:
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2 ml/每个样本工作液体积=54 ml
   微孔检测法:
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200 μl/每个样本工作液体积=5.4ml
   2)根据计算出的BCA工作液需要总量,将试剂A和试剂B按照50:1的体积比,配制BCA工作液,充分混匀。
注意:(1)由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1-2个孔。
      (2)新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。
3.定量检测

   试管检测法(蛋白浓度检测范围:20-2000 μg/ml)


   1)按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100 μl 分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
   2)向每个试管中各加入2 ml BCA工作液,充分混匀,37℃水浴中孵育30min或室温孵育2h
   3)将各管冷却至室温。
   4)用分光光度计在562 nm处测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。

   5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。


    微孔检测法(蛋白浓度检测范围:20-2000 μg/ml)
   1)按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25 μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
   2)每孔加入200 μl  BCA工作液,充分混匀,盖上96孔板盖, 37℃孵育30min。
   3)冷却至室温。
   4)用酶标仪在540--590 nm范围内,测定每个样品及BSA标准品吸光值,做好记录。
   5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:(1)BCA法测定蛋白浓度时,吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5min内完成,否则会影响蛋白定量的准确度。
      (2)建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
      (3)由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
     (4)未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
     (5)如果得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。