快速琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒参考价： ￥190
价格： ￥171
货品编号： DY6258
规格：
50T
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| 快速琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒 | ||||||||
| Gel Extraction Kit | ||||||||
| 离心柱式 | ||||||||
| Cat No:DY6258 | ||||||||
| Kit Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 50preps | 200preps | ||||||
| Buffer 1# | 50ml | 2*100ml | ||||||
| Buffer 2# | 15ml | 60ml | ||||||
| Buffer (concentrate) 3# | 10ml | 50ml | ||||||
| Buffer 4# | 10ml | 30ml | ||||||
| 吸附柱 | 50 | 200 | ||||||
| 收集管 | 50 | 200 | ||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
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本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过独特的离心吸附柱快速的结合
DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化 70 bp-10 kb 的 DNA 片段，溶胶速度快，每个吸附柱最高可吸附 10 μg 的
DNA，同时有效去除引物、核苷酸、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的 DNA
纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。 |
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| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1.本实验需要无水乙醇、异丙醇、离心管请自备。 | ||||||||
| 2.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果。 | ||||||||
| 3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。 | ||||||||
| 4..使用前请检查Buffer 1#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。 | ||||||||
| 4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 3#中加入无水乙醇。 | ||||||||
| 5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。 | ||||||||
| 6.所有离心步骤17,900×g（~13,000 rpm）均为使用台式离心机在室温下离心。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1. 将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管（自备）中，称取重量。 | ||||||||
| 注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。 | ||||||||
| 2. 向胶块中加入3倍体积Buffer 1#；当琼脂糖凝胶浓度>2%时，建议使用6倍体积Buffer 1#（如凝胶重为100 mg，其体积可视为100 μl，依此类推）。 | ||||||||
| 3. 50℃孵育10min，其间每隔2-3min温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解。 | ||||||||
| 注意：1）当琼脂糖凝胶浓度>2%时，适当延长孵育时间。 | ||||||||
| 2）胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合 DNA 的能力较弱。 | ||||||||
| 3 ) 检测胶溶液的 pH 值，若 pH 值大于 7.5，可向含有 DNA 的胶溶液中加 10-30 μl 的 3 M 醋酸钠（pH 5.0）将 pH 值调到 5-7。 | ||||||||
| 4. （可选步骤）当回收片段<500 bp或>4 kb时，应加入1倍胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀(如凝胶重100mg，则加入100 μl的异丙醇）。 | ||||||||
| 注意：当回收片段<500 bp或>4 kb时，加入1倍胶体积的异丙醇，可以增加DNA片段的回收率；当回收片段为500 bp-4 kb时，加入异丙醇不会影响回收率。 | ||||||||
| 5. 柱平衡：向吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中加入200 μl Buffer 2#，17,900×g（~13,000 rpm）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 6. 将步骤3或4所得溶液加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，室温放置2min，17,900×g（~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：吸附柱容积为700 μl，若样品体积大于700 μl 可分批加入。 | ||||||||
| 7. （可选步骤）向吸附柱中加入500 μl Buffer 1#，17,900×g（~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：如果后续实验用于直接测序、体外转录或显微注射，推荐用此步骤以除去所有凝胶。 | ||||||||
| 8. 向吸附柱中加入750 μl Buffer 3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），17,900×g（~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入Buffer 3#静置2-5min再离心。 | ||||||||
| 9. 17,900×g（~13,000 rpm）离心1min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 | ||||||||
| 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 | ||||||||
| 10. 将吸附柱放到一个新的离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加50 μl Buffer 4#（pH 8.5），室温放置2min。17,900×g（~13,000 rpm）离心1min，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。 | ||||||||
| 注意：1） 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。 | ||||||||
| 2） 为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤10。 | ||||||||
| 3） 洗脱体积不应小于30 μl，体积过少会影响回收效率。 | ||||||||
| 4） 如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。 | ||||||||
| 5） 回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer 4#应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。 | ||||||||