超纯RNA提取试剂盒（含DnaseI）参考价： ￥980
价格： ￥882
货品编号： DY6171A
规格：
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| 超纯RNA提取试剂盒（含DnaseI） | ||||||||
| Ultrapure RNA Kit | ||||||||
| Cat No：DY6171A | ||||||||
| Kit Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 50T | |||||||
| DNase I | 1000U | |||||||
| 10×Reaction Buffer | 1ml | |||||||
| Buffer 1 # | 60ml | |||||||
| Buffer 2 # | 40ml | |||||||
| Buffer 3 #（concentrate） | 11ml | |||||||
| Buffer 4 # | 10ml | |||||||
| 吸附柱 | 50个 | |||||||
| 收集管 | 50个 | |||||||
| 离心管 | 50个 | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂盒中DNase I、10×Reaction Buffer：-20 ℃,Buffer 1 #保存在2-8℃，其余组化室温（15-25℃）干燥条件下保存。保质期一年 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 本试剂盒是北京德元国际科技有限公司改进后的柱式总RNA提取试剂盒，裂解液充分裂解并匀质化样本，采用独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA，同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等；可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA，每次可处理30-50 mg组织或5×106细胞，可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 本实验需要无水乙醇、氯仿、异丙醇等请自备。 | ||||||||
| 2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 | ||||||||
| 3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。 | ||||||||
| 4. 配制溶液应使用无RNase的水。 | ||||||||
| 5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 | ||||||||
| 6. 提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。 | ||||||||
| 7. 使用前若发现Buffer 1 #有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。 | ||||||||
| 8. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer 3 #中加入无水乙醇。 | ||||||||
| 9. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。 | ||||||||
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| 操作步骤 | ||||||||
| 1.样品处理： | ||||||||
| 1）组织：30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1 ml Buffer 1 #，或在组织样品中 加入1 ml Buffer 1 #后匀浆处理.样品体积不超过Buffer 1#体积的10%。 | ||||||||
| 2) 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量Buffer 1 #，每10 cm2 加入1 ml Buffer 1 #。 | ||||||||
| 3) 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106细胞加入1 ml Buffer 1 #。 | ||||||||
| 2.将匀浆样品反复吹打几次，在室温条件下静置5min，使蛋白核酸复合物完全分离。 | ||||||||
| 3.向以上溶液中加入氯仿，每使用1mlBuffer 1 #加入0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3min。 | ||||||||
| 4. 4℃ 12,000 rpm离心10min，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在水相中，把水相（约600μl）转移到一个新的离心管（自备）中。 | ||||||||
| 5.在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇（无RNase水配制），颠倒混匀。 | ||||||||
| 6. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rmp离心20s,倒掉收集管中的溶液，将吸附柱重新装入收集管中。 | ||||||||
| 7．向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#，12,000 rpm离心20s，倒掉收集管中的废液， | ||||||||
| 8. 配制DNase I 混合液：取52 μl Buffer 4 #，向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I（1 U/μl），混匀， 配制成终体积为80 μl的反应液。 | ||||||||
| 9. 向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液，20-30℃孵育15min。 | ||||||||
| 10.向吸附柱中加入350 μl Buffer2#, 10,000 rpm离心1min，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 11．向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心20s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 12.重复步骤11 | ||||||||
| 13．12,000rpm离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR等）。 | ||||||||
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14. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50 μl Buffer 4
#，室温放置1min，12,000 rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。 注意：1）Buffer 4 #体积不应小于30 μl，体积过小影响回收率。 2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的Buffer 4 #重复步骤14 3）如果要提高RNA浓度，可将所得溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤14。 |
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