超纯RNA提取试剂盒 | ||||||||
Ultrapure RNA Kit | ||||||||
Cat No:DY6171 | ||||||||
Kit Size:50T | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents | 50T | |||||||
Buffer 1 # | 60ml | |||||||
Buffer 2 # | 40ml | |||||||
Buffer 3 #(concentrate) | 11ml | |||||||
Buffer 4 # | 10ml | |||||||
吸附柱 | 50个 | |||||||
收集管 | 50个 | |||||||
离心管 | 50个 | |||||||
储运条件 | ||||||||
本试剂盒中Buffer 1
#保存在2-8℃,其余组化室温(15-25℃)干燥条件下 可保存。保质期一年 |
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说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
本试剂盒是北京德元国际科技有限公司改进后的柱式总RNA提取试剂盒,裂解液充分裂解并匀质化样本,采用独特的硅基质膜吸附技术,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA,同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等;可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA,每次可处理30-50 mg组织或5×106细胞,可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。 | ||||||||
实验前准备及注意事项 | ||||||||
1. 本实验需要无水乙醇、氯仿、异丙醇等请自备。 | ||||||||
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。 | ||||||||
3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min,用水彻底冲洗后高压灭菌。 | ||||||||
4. 配制溶液应使用无RNase的水。 | ||||||||
5. 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。 |
6. 提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。 | ||||||||
7. 使用前若发现Buffer 1 #有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。 | ||||||||
8. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer 3 #中加入无水乙醇。 | ||||||||
9. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。 | ||||||||
10. 若下游实验对 DNA 非常敏感,建议用不含 RNase 的 DNaseI(货号:LY6060)对 RNA 进行处理。 | ||||||||
操作步骤 | ||||||||
1. 样品处理: | ||||||||
1)组织:30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1 ml Buffer 1 #,或在组织样品中 加入1 ml Buffer 1 #后匀浆处理.样品体积不超过Buffer 1#体积的10%。 | ||||||||
2) 单层培养细胞:吸去培养液,加入适量Buffer 1 #,每10 cm2 加入1 ml Buffer 1 #。 | ||||||||
3) 细胞悬液:离心收集细胞。每5×106细胞加入1 ml Buffer 1 #。 | ||||||||
2. 将匀浆样品反复吹打几次,在室温条件下静置5min,使蛋白核酸复合物完全分离。 | ||||||||
3. 向以上溶液中加入氯仿,每使用1mlBuffer 1 #加入0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2-3min。 | ||||||||
4. 4℃ 12,000 rpm离心10min,此时样品分成三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在水相中,把水相(约600μl)转移到一个新的离心管(自备)中。 | ||||||||
5.在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制),颠倒混匀。 | ||||||||
6. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rmp离心20s,倒掉收集管中的溶液,将吸附柱重新装入收集管中。 | ||||||||
7.向吸附柱中加入700 μl Buffer 2#,12,000 rpm离心20s,倒掉收集管中的废液, | ||||||||
8.向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心20s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
9.重复步骤8 | ||||||||
10.12,000rpm离心2min,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。 | ||||||||
11. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50 μl Buffer 4
#,室温放置1min,12,000 rpm离心1min,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。 注意:1)Buffer 4 #体积不应小于30 μl,体积过小影响回收率。 2)如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的Buffer 4 #重复步骤11 3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤11。 |