血液RNA提取试剂盒

血液RNA提取试剂盒
RNApure Blood Kit
（离心柱式）
Cat No:DY6172
Kit Size:50T


产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1 #（10X）	60ml
		Buffer 2 #	35ml
		Buffer 3 #	40ml
		Buffer 4 #(concentrate)	11ml
		Buffer 5 #	10ml
		过滤柱	50
		吸附柱	50
		1.5ml离心管	50
		2ml收集管	100


储运条件
	加入β-巯基乙醇的2#裂解液可以保存一月，其他试剂常温保存。
说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒适用于从新鲜全血（用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）中提取总RNA，可以处理1.5ml的全血，洗脱可以得到大于200bp的高纯度RNA,多个样品可以在1h内完成。本产品无需CsCI纯化的超离心步骤和LiCI或乙醇沉淀，不含有苯酚或氯仿等有毒溶剂，经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶抑制剂和污染物，可直接用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Norhern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
实验前准备及注意
	1. 样品应避免反复冻融，否则影响提取RNA提取率和质量。样品在Buffer 2 #中，可于-70℃保存一个月。
	2. 使用前请检查Buffer 2 #是否出现结晶或者沉淀，可置于56℃水浴冲洗溶解。Buffer 2 #在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度1%。如1ml Buffer 2 # 加β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer 2 #室温下可于保存1个月。
	3. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 4 #中加入无水乙醇。
	4. 本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样品RNA提取。

	5. Buffer 1 #（10X）需要在使用前将溶液用于RNase的水进行10倍稀释，稀释后置于2-8℃ 保存。
	6. 若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I (货号:LY6060）对RNA进行处理。
	7. 需要自备的试剂：β-巯基乙醇、70%乙醇（用于RNase的水配制)、无水乙醇。
预防RNase污染，应注意事项
	1. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
	2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,用水彻底冲洗后高压灭菌。
	3. 配制溶液应使用无RNase的水。
	4.操作人员戴一次性口罩和手套，并且要经常换手套。

操作步骤
	1. 向0.5-1.5ml新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍体积的1X Buffer 1 # （请于使用前用无RNase的水将10 X Buffer 1 # 稀释10倍），轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15min，孵育过程中混匀两次。
	注意:孵育过程中浑浊的悬液变成透明，证明红细胞被裂解，必要时可以把孵育时间延长至20min.
	2. 4℃ 2100 rpm(400xg)离心10min,小心吸弃上清液。
	3. 向以上沉淀中加入2倍血液样品体积的1倍Buffer 1 #（请于使用前用无RNase的水将10x Buffer 1 #稀释10倍)，轻轻涡旋，充分重悬沉淀。
	4. 4℃ 2100 rpm(400xg)离心10min,小心吸弃上清液。
	注意：此步一定要完全去除上清液否则影响裂解导致RNA产量下降。
	5. 向沉淀中加入Buffer 2 #（使用前检查是否加入β-巯基乙醇），0.5-1.5ml血液样品加入600μl Buffer 2 #,或小于0.5ml血液样本加入350μl Buffer 2 #，混匀。
	6. 将所得液体转移到过滤柱（过滤柱应预先装入收集管中）中，12000rpm（-13400 x g）离心2min,收集滤液，弃掉过滤柱。
	7. 向所得滤液加入1倍体积（600μl或350μl）的70%乙醇（无RNase水配制），混匀。
	注意:加入乙醇后可能产生沉淀，不会影响后续实验。
	8. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rmp离心15s,倒掉收集管中的溶液，将吸附柱重新装入收集管中。
	9. 向吸附柱中加入700μl Buffer 3 #，12000rpm离心15s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	10.向吸附柱中加入500μl Buffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心15s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新收回收集管中。

	11.重复步骤10。
	12. 12000rpm离心2min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：此步的目的是将吸附柱中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR）。
	13. 将吸附柱置于一个新的无RNase的离心管（1.5ml）中，向吸附柱的中间部位加入30-50μl Buffer 5# ，室温放置1min，12000rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
	注意：1）Buffer 5#液体的体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
	2）如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的5#溶液重复步骤13.
	3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤13.

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