酵母基因组提取试剂盒

酵母基因组 DNA 提取试剂盒
YeastGen DNA Kit
离心柱式
Cat No:DY6006
Kit Size:50T


产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	15ml
		Buffer 2#	15ml
		Buffer 3#(concentrate)	13ml
		Buffer 4#(concentrate)	15ml
		Buffer 5#	15ml
		Buffer 6#	1ml
		Buffer 7#	30ml
		Buffer 8#	300 μl
		玻璃珠	2g
		离心管	50
		吸附柱	50
		收集管(2ml)	50

储运条件
	本试剂盒中Buffer 6#和Buffer 8#保存在-20℃，可保存12个月。其它组分室温（15-25℃）条件下可保存12个月，更长时间保存可置于2-8℃。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒适用于从酵母样品中提取高纯度的总DNA，本品无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，可获得最大为50 kb的DNA，同时对100 bp的DNA片段也能有效的回收。德元国际开发的酵母试剂盒采用优化的缓冲液体系使裂解液中的DNA高效结合在硅胶膜上，而其他污染物可流过膜，使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度的DNA。提取的DNA可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
实验前准备及注意事项
	1. 本实验需要无水乙醇，β-巯基乙醇，请自备。
	2. Buffer6#和Buffer 8#勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
	3. 全部离心步骤可在室温下进行。
	4.使用前请检查 Buffer 1# ，Buffer 2#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer 1# ，Buffer 2# 于 56℃水浴孵育恢复澄清。

	5. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 3#和Buffer 4#中加入无水乙醇。
	6．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。对于有些细胞壁较厚以及在培养阶段会产生大量代谢物的酵母，建议在生长早期收集样品。
	7. Buffer 7#在使用前请加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%。
	8. 如果下游实验对RNA污染比较敏感，可加入4 μl DNase-Free的RNase A（100 mg/ml），RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，Cat No:LY5012。
操作步骤
	1．取1-5 ml 酵母培养物（最多不超过5×107个细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml）， 12,000 rpm（~13,400×g）离心1min，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
	注意：菌液较多时，可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
	2．酵母细胞壁的去除：向菌体中加入600 μl Buffer 7#（使用前检查是否加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），并加入5 μl Buffer 8#（10 U/μl），充分混匀。30℃处理30min。4,000 rpm（~1,500×g）离心10min，弃上清，收集沉淀。
	注意：以上为5×107酵母细胞Buffer 8#用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用的Buffer 8#的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
	3. 向沉淀中加入200 μl Buffer 1#，加入40mg 玻璃珠，涡旋5min，12,000 rpm离心5min，将上清移到一个新的离心管中。
	4．加入20 μl Buffer 6#，混匀。55℃振荡水浴，至细胞完全裂解。若无振荡水浴箱，温育期间每20-30min颠倒混匀一次。（一般情况下，不超过1hy细胞即可完全裂解）。
	注意：如需去除RNA，在上述步骤完成后，加入4 μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液（Cat No:LY5012），震荡混匀，室温放置5-10min。
	5． 13000rpm离心5min，小心吸取上清至新离心管中。
	6．加入200 μl Buffer 2#，充分混匀。70℃孵育10min，其间颠倒混匀数次。
	注意：若孵育后溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。
	7．加入200 μl 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
	8．将步骤 7 所得溶液全部加入吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次最多不超过700 μl，可分多次转入。10000 rpm离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

	9. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	10. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
	11. 12,000rpm离2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
	12. 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer 5# ，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
	注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
	2）离心之前室温孵育5min可以增加产量。
	3）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer5#洗脱并于-20℃保存。
	4）如果要提高DN的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存。

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