病毒基因组提取试剂盒

病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
VirusGen Purification Kit
离心柱式
Cat No:DY6005
Kit Size:50T


产品组分
		组分 Contents	50preps
		Buffer 1#	15ml
		Buffer 2#(concentrate)	13ml
		Buffer 3#(concentrate)	15ml
		Buffer 4#	15ml
		Buffer 5#	1ml
		离心管	50
		吸附柱	50
		收集管(2ml)	50

储运条件
	本试剂盒中Buffer 6#保存在-20℃，可保存12个月。其它组分室温（15-25℃）条件下可保存12个月，更长时间保存可置于2-8℃。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取病毒RNA和DNA。本品无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，操作简单。本试剂盒采用独特的缓冲体系使裂解液中的病毒核酸高效特异地结合在硅胶质离心吸附柱上，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步有效的漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度的病毒核酸。纯化的病毒核酸不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR、RT-PCR、Real-Time PCR、印迹实验等。
实验前准备及注意事项
	1. 本实验需要无水乙醇，请自备。
	2. Buffer 5#勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
	3. 全部离心步骤可在室温下进行。
	4.使用前请检查 Buffer 1# 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer 1# 于 56℃水浴孵育恢复澄清。
	5. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 2#和Buffer 3#中加入无水乙醇。
	6．血清或血浆避免反复冻融，反复冻融会导致蛋白变性或产生沉淀，减少病毒滴度进而影响提取病毒核酸的产量。

操作步骤
	1．取1.5 ml离心管（自备），加入20 μl Buffer5#。
	2．向离心管中加入200 μl血清或血浆。加入200 μl Buffer 1#，涡旋震荡15s。
	注意：1）样本体积不足200 μl可以加入0.9% NaCl（自备）补足。
	2）为确保样本有效裂解，加入Buffer 1#后，需将样本与Buffer 1#充分混匀。
	3. 置于56℃水浴，孵育15min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
	4．加入250 μl无水乙醇，涡旋震荡15s，室温放置5min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
	注意：如果环境温度超过25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。
	5．将步骤 4 所得溶液全部加入吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，一次最多不超过700 μl，可分多次转入。8000 rpm离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	6. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 2#（使用前检查是否已加入无水乙醇），8000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	7. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），8000rpm离心3min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
	注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
	8．向吸附柱中加入500 μl无水乙醇，8,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	9. 12,000rpm离心3min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
	10. 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer 4# 或灭菌水，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
	注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
	2）离心之前室温孵育5min可以增加产量。
	3）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer4#洗脱并于-20℃保存。
	4）如果要提高DNA/RNA的终浓度，可以将所得的DNA/RNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存。

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