游离核酸(血清血浆尿液等核酸)提取试剂盒参考价： ￥490
价格： ￥441
货品编号： DY6016
规格：
50T
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| 游离核酸(血清血浆尿液等核酸)提取试剂盒 | ||||||||
| BloodGen Midi Kit | ||||||||
| 离心柱式 | ||||||||
| Cat No:DY6016 | ||||||||
| Kit Size:50T | ||||||||
| 产品组分 | ||||||||
| 组分 Contents | 50preps | |||||||
| Buffer 1# | 15ml | |||||||
| Buffer 2# | 50ml | |||||||
| Buffer 3#(concentrate) | 13ml | |||||||
| Buffer 4#(concentrate) | 15ml | |||||||
| Buffer 5# | 15ml | |||||||
| Buffer 6# | 1ml | |||||||
| 吸附柱 | 50 | |||||||
| 收集管(2ml) | 50 | |||||||
| 储运条件 | ||||||||
| 本试剂盒中Buffer 6#保存在-20℃，可保存12个月。其它组分室温（15-25℃）条件下可保存12个月，更长时间保存可置于2-8℃。 | ||||||||
| 说 明 | ||||||||
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
| 产品简介 | ||||||||
| 本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1 ml的血清或者血浆，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。 | ||||||||
| 实验前准备及注意事项 | ||||||||
| 1. 本实验需要无水乙醇，请自备。 | ||||||||
| 2．本试剂盒最多可以提取0.1-1 ml血清血浆样品或1×107个白细胞。 | ||||||||
| 3. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 | ||||||||
| 4. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 3#和Buffer 4#中加入无水乙醇。 | ||||||||
| 5. 使用前请检查Buffer 2#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer 2# 于56℃水浴孵育重新溶解。 | ||||||||
| 6. Buffer 6#勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。 | ||||||||
| 8.如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入4 μlDNase-Free的RNaseA（100mg/ml），RNaseA本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，Cat No:DY5012。 | ||||||||
| 操作步骤 | ||||||||
| 1. 样品处理：向离心管（自备）中加入0.1-1 ml样本。当血清/血浆样本量小于200 μl 时，加入Buffer 1#，补足至200μl。 | ||||||||
| 注意：1）本品适用于0.1-1ml的血清/血浆样本基因组提取。 | ||||||||
| 2）当样品量超过200 μl时，无需再补加Buffer 1#。 | ||||||||
| 2. 向以上溶液中加入20 μl Buffer 6#，混匀。 | ||||||||
| 注意：当血清/血浆样本量大于500μl时，Buffer 6#可适当加倍 | ||||||||
| 3．加入1倍样本体积的Buffer 2#，颠倒混匀15次，剧烈震荡至少1min。 | ||||||||
| 注意：1）如果下游试验对RNA敏感，可加入4 μl RNaseA（100mg/ml）溶液(Cat No:LY5012),震荡15s，室温放置5min。 | ||||||||
| 2)不要直接将Buffer 6#直接加入到Buffer 2#。 | ||||||||
| 4．56℃孵育10min，其间颠倒混匀数次。 | ||||||||
| 注意：孵育10minDNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。 | ||||||||
| 5．加入1倍样本体积的无水乙醇，颠倒混匀10次，剧烈震荡。短暂离心，使管壁和壁 盖上的液体集中到管底。 | ||||||||
| 6． 将步骤 5 所得溶液全部加入吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)，若一次不能加完溶液，可分多次转入。10,000rpm（～11,500×g）离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
| 7． 向吸附柱中加入500 μlBuffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤7。 | ||||||||
| 8. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 4#（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
| 注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8. | ||||||||
| 9. 10,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 | ||||||||
| 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。 | ||||||||
| 10. 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μlBuffer 5#，室温放置2-5min，10,000rpm离心1min，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。 | ||||||||
| 注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。 | ||||||||
| 2）离心之前室温孵育5min可以增加产量。 | ||||||||
| 3）如果要增加产量可以加入50-200 μlBuffer5#或灭菌水再次洗脱。 | ||||||||
| 4）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10； | ||||||||
| 5）若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μlBuffer 5#或灭菌水洗脱。 | ||||||||
| 6）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer5#洗脱并于-20℃保存。 | ||||||||