血液基因组柱式小量提取试剂盒 (0.1-1 ml) | ||||||||
BloodGen Mini Kit | ||||||||
离心柱式 | ||||||||
Cat NoDY6001 | ||||||||
Kit Size:50T/200T | ||||||||
产品组分 | ||||||||
组分 Contents | 50preps | 200preps | ||||||
Buffer 1# | 150ml | 4x125ml | ||||||
Buffer 2# | 15ml | 50ml | ||||||
Buffer 3# | 15ml | 50ml | ||||||
Buffer 4#(concentrate) | 13ml | 52ml | ||||||
Buffer 5#(concentrate) | 15ml | 50ml | ||||||
Buffer 6# | 15ml | 60ml | ||||||
Buffer 7# | 1ml | 4x1ml | ||||||
吸附柱 | 50 | 200 | ||||||
收集管(2ml) | 50 | 200 | ||||||
储运条件 | ||||||||
本试剂盒中Buffer 7#保存在-20℃,可保存12个月。Buffer 1#保存在4℃。其它组分室温(15-25℃)条件下可保存12个月,更长时间保存可置于2-8℃。 | ||||||||
说 明 | ||||||||
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。 | ||||||||
产品简介 | ||||||||
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1 ml的全血,最高得率可达30 μg,可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA,纯化的DNA产量高、质量好,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染,可直接用于PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。 | ||||||||
实验前准备及注意事项 | ||||||||
1. 本实验需要无水乙醇,请自备。 | ||||||||
2. 本试剂盒可从0.1-1.0ml的全血或1×107个白细胞中提取基因组DNA。 | ||||||||
3. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 | ||||||||
4. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer 4#和Buffer 5#中加入无水乙醇。 | ||||||||
5. 使用前请检查Buffer 3#是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer 3# 于56℃水浴孵育重新溶解。 | ||||||||
6. Buffer 7#勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。 | ||||||||
7. 试剂盒中的Buffer 1#浑浊后不能继续使用。 |
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8.如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以加入4 μlDNase-Free的RNaseA(100mg/ml),RNaseA本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,Cat No:LY5012。 | ||||||||
操作步骤 | ||||||||
1.样品处理:本品适用于0.1-1ml的抗凝血液样本基因组提取。 | ||||||||
1) 如果样品量为100--200 μl时。直接加入Buffer 2#,补足200 μl后进行后续实验。 | ||||||||
2)如果血液样本量超过200 μl时,需要先加入3倍体积的Buffer 1#,轻轻涡旋或颠倒混匀,10,000 rpm(~8,000×g)离心1min,小心吸弃上清液。 | ||||||||
如果沉淀中还有红色,可以重复以上步骤一次。 | ||||||||
再向沉淀中加入200 μl Buffer 2#,震荡至彻底混匀后进行后续实验。 | ||||||||
3)如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血,其红细胞为有核细胞,血液样本量为5-20 μl,可加入Buffer 3#,补足至200 μl后进行后续实验。 | ||||||||
注意:如果下游试验对RNA敏感,可加入4 μl RNase A(Cat No:LY5012)溶液,震荡15s,室温放置5 min。 | ||||||||
2. 加入20 μl Buffer 7#,涡旋混匀。 | ||||||||
3.加入200 μl Buffer GL,颠倒混匀15次,剧烈震荡至少1min。 | ||||||||
注意:不要直接将Buffer 7#直接加入到Buffer 3#。 | ||||||||
4.56℃孵育10min,其间颠倒混匀数次。 | ||||||||
注意:孵育10minDNA的产量已经达到最大,继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。 | ||||||||
5. 加入200 μl 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。 | ||||||||
6. 将步骤 5 所得溶液全部加入吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。10,000rpm(~11,500×g)离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 | ||||||||
7. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 4#(使用前检查是否已加入无水乙醇),10,000rpm 离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
8. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 5#(使用前检查是否已加入无水乙醇),10,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 | ||||||||
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8. | ||||||||
9. 10,000rpm离心2min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 | ||||||||
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。 |
10. 将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μlBuffer 6#,室温放置2-5min,10,000rpm离心1min,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。 | ||||||||
注意:1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。 | ||||||||
2)离心之前室温孵育5min可以增加产量。 | ||||||||
3)如果要增加产量可以加入50-200 μlBuffer6#或灭菌水再次洗脱。 | ||||||||
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10; | ||||||||
5)若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μlBuffer 6#或灭菌水洗脱。 | ||||||||
6)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer 6#洗脱并于-20℃保存。 |