无内毒素质粒中提试剂盒

无内毒素质粒中提试剂盒
EndoFree Plasmid Midi Kit
离心柱式
Cat No:DY6116
Kit Size:50T
产品组分
		组分 Contents			50preps
		Buffer 1#			30ml
		Buffer 2#			30ml
		Buffer 3#			30ml
		Buffer 4#			15ml
		Buffer (concentrate) 5#			10ml
		Buffer 6#			15ml
		Buffer 7#			600μl
		过滤柱			50
		吸附柱			50
		收集管			100




储运条件
	本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。
	本试剂盒置于室温15℃-25℃的干燥条件下，可以保存12个月。2℃-8℃保存可以保存更长时间，但是容易产生沉淀，使用前应将试剂盒内的所有溶液在室温平衡30min,必要时可在37水浴中预热10min,易溶解沉淀。

说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。

产品简介
	内毒素是质粒提取过程中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素很敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。
	本试剂盒采用先进的硅基质膜吸附技术，高效专一的结合质粒DNA；并且拥有特殊的缓冲液系统，内有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白质等杂质。
	本试剂盒最大限度去除内毒素，并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染，操作简单方便。
参考说明
	样品量		所得率	洗脱体积		实验时间	提取方法
	5-15ml箘液		5-100μg	100-300μl		1h-1.5 h	离心柱式

实验前准备及注意事项
	1.本实验需要无水乙醇、异丙醇，本试剂盒中没有配置，请自备。
	2.试剂盒所以组分应在室温静置30min以上。
	3.溶液配制;第一次使用前，将Buffer 7#溶液全部加入到Buffer1# 中，混匀，置于2-8℃保存。
	4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 5#中加入无水乙醇。

	5.使用前请先检查Buffer 2 #和Buffer 3#是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
	6.注意Buffer 2 #和Buffer 3#含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。
	7.实验前使用Buffer 4#处理吸附柱，可最大限度的激活硅基质膜，提高质粒得率。
	8.使用Buffer 4#处理过的吸附柱最好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。
	9.提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
	10.所有离心步骤均可在室温下进行。
操作步骤
	1．取5-15 ml（根据培养菌体的浓度选择合适的量，建议最多不超过15ml）过夜培养的菌液，加入离心管（自备）中，6,200×g离心2-3min收集细菌，尽量吸弃全部上清。
	注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer 1#、2#及3#的量需加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
	2．向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl Buffer 1#（请先检查是否已加入Buffer 7#），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
	注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低
	3．向离心管中加入500μl Buffer 2#，温和地上下颠倒混匀6-8次，使菌体充分裂解，室温放置3-5min。此时溶液应变得清亮粘稠。
	注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免造成基因组DNA污染。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
	4．向离心管中加入500μl Buffer 3#，立即上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5min。16,200×g离心10min，吸取上清液，将上清液加入过滤柱（过滤柱预先装入收集管中）中，16200×g离心1min过滤，将滤液转移到新的离心管中。
	注意：Buffer 3# 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
	5．向上述滤液中加入450μl异丙醇(加入异丙醇过多容易导致RNA污染)，上下颠倒混匀。
	6．柱平衡：向吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中加入200μl Buffer 4#，16,200 ×g离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中
	7．将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱（已装入收集管）中。
	8．16,200×g离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
	注意：吸附柱的最大容积为为750 µl，所以第7步中所得溶液分3次过柱。
	9．向吸附柱中加入750μl Buffer 5#（请先检查是否已加入无水乙醇），16,200×g 离心1min，倒掉收集管中的废液。

	10.将吸附柱重新放回收集管中，16,200×g离心5min，倒掉废液，将吸附柱置于室温5-10min，以彻底晾干。
	注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
	11.将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入50-100μl Buffer 6#，室温放置2-5min，16,200×g离心2min，将质粒溶液收集到收集管中。-20℃保存质粒。
	注意：1）为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5min，16,200×g离心5min。 Buffer 6#在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。
	2）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。

咨询类型：	商品咨询
咨询内容：
联系方式：
*验证码：

全部商品分类

新闻公告

关于德元

德元动态

企业文化

代理商信息

购物指南